مقايسه روش‌هاي مختلف رديابي قارچ Rosellinia necatrix در خاك

COMPARISON OF DIFFERENT DETECTION METHODS OF Rosellinia necatrix IN SOIL

براي دستيابي به روش ساده و حساس جهت رديابي قارچ Rosellenia necatrix عامل پوسيدگي رزلينيايي ريشه در خاك و ريشه، مقايسه اي بين روش هاي كشت مستقيم خاك و ريشه آلوده در محيط كشت هاي ,MEAR MEAR+ پنكونازول و MEAS، تكنيك Nested PCR و تله‌گذاري صورت گرفت. استخراج مستقيم DNA از خاك و ريشه ها انجام شد و رديابي بيمارگر با استفاده ازآغازگرهاي اختصاصيR2، R8 و R7، R10 در Nested PCR انجام شد. به منظور بررسي رابطه بين ميزان مايه‌زني اوليه و زمان لازم بعد از مايه‌زني بيمارگر براي رديابي و بروز علايم بيماري، آزمايشي در دو تكرار انجام شد، تكرار اول مقدار 2، 4، 8، 16، 32 گرم بذر گندم آلوده به عنوان زاد‌‌مايه اوليه به خاك اضافه و سپس گياه باقلا به عنوان گياه آزمون كشت شد. نمونه برداري در يك ماه و هر هفت روز يك بار انجام شد. درتكرار دوم مقدار مايه‌زني 25/0 ، 5/0، 1، 2، 4، 8 ، 16، 32 گرم بذر گندم آلوده و زمان هاي نمونه‌برداري 0، 2، 4، 8، 16، 32، 64 و 128 روز تغيير يافت. نتايج نشان داد با افزايش مايه تلقيح، زمان لازم جهت رديابي و بروز علايم بيماري كاهش مي‌يابد، هم‌چنين مشخص گرديد بيمارگر قبل از اين كه روي ميزبان ايجاد بيماري كند به وسيله Nested PCR قابل رديابي است. روش Nested PCR از ساير روش‌هاي به كار برده شده مناسب‌تر و سريع‌تر تشخيص داده شد.

To achieve a simple and sensitive Rosellinia necatrix detection method in soil, three detection methods including soil direct culture method, infected soil in culture media e.g. MEAR, MEAR + penconazole and MEAS, Nested PCR method and bait twig method were compared. Direct DNA Extraction from soil was done. Two specific primer pairs R2، R8 and R7، R10 in Nested PCR were used and the extracted DNA was purified using PVPP column. Among used methods, the direct culture method from soil was not suitable and wasn’t sensitive for detection. However, bait twig method was capable to detect, the pathogen in soil and root but it is time consuming and laborious method. In conventional PCR, using primer pairs R2-R8, 10 pg ?l?1 of fungal DNA was detected; however in Nested PCR using R7-R10 primer pairs, 1fg ?l?1 of fungal DNA was detected. Among used methods, the Nested PCR was better in detection of the fungus. Nested PCR method of detection in soil and root is more sensitive and reliable.