انتقال siRNA نشاندار با لوتسيم به داخل سلول هاي سرطاني كولون با استفاده از ليپوزوم ها: مطالعه مقايسه اي

Lutetium labeled-siRNA Delivery into Colon Cancer Cells Using Liposomes: A Comparative Study

سابقه و هدف: اثر خاموش سازي ژن با siRNA به طور قابل توجهي به يك روش مناسب جهت عرضه آن به سلول ها بستگي دارد. در پژوهش حاضر، اثر ليپوزوم ها در انتقال كمپلكس siRNA - 177Lu به سلول هاي سرطاني كولون به طور كمي مورد مطالعه قرار گرفته است. مواد و روش ها: siRNA با p-SCN-Bn-DTPA كونژوگه و با لوتسيم نشاندار شد. كمپلكس هاي siRNA - 177Lu پس از تخليص با ستون هاي Vivaspin و سفادكس G25، به منظور تعيين در صد خلوص و سالم بودن به ترتيب با ITLC و PAGE بررسي شدند. siRNA هاي نشاندار با استفاده از ليپوفكتامين و siPORT Neo FX به سلول هاي سرطاني كولون ترانسفكت شدند، سپس در صد ترانسفكشن با شمارشگر گاما به طور كمي محاسبه گرديد. از تصاوير ميكروسكوپي و شمارش سلولي براي بررسي اثرات سيتوتوكسيك كمپلكس هاي نشاندار روي سلول هاي سرطاني استفاده شد. يافته ها: ITLC نشان داد كه خلوص كمپلكس هاي siRNA - 177Lu توليد شده، بيش از %95 بود. در صد ترانسفكشن كمپلكس siRNA - 177Lu به سلول هاي سرطاني كولون توسط ليپوفكتامين در مقايسه با siPORT Neo FX به طور معني دار بالا بود (P < 0.01). شمارش سلولي و تصاوير ميكروسكوپي نشان داد كه كمپلكس siRNA - 177Lu ضد IGF-1R اثر سيتوتوكسيك معني داري روي سلولهاي مورد مطالعه نسبت به گروه كنترل دارد (P < 0.001). نتيجه گيري: پژوهش حاضر نشان مي دهد كه كارايي ليپوفكتامين در انتقال كمپلكس siRNA - 177Lu به سلول هاي سرطاني كولون در مقايسه با siPORT Neo FX بيشتر است و siRNA - 177Lu ضد IGF-1R اثر سيتوتوكسيك بر روي سلول هاي سرطاني كولون دارد.

Aim and Background. Gene silencing effect of siRNA significantly depends upon an appropriate method to introduce it into the cells. In the present study, the effect of liposomes on 177Lu-siRNA delivery into colon cancer cells has been studied quantitatively. Material and Methods. siRNA was conjugated with p-SCN-Bn-DTPA and labeled with lutetium. After being purified with Vivaspin and Sephadex G25 columns, 177Lu-siRNA complexes were evaluated for purity and integrity using ITLC and PAGE, respectively. Labeled siRNAs were transfected into colon cancer cells using Lipofectamine and siPORT Neo FX. Then, percentage of the transfection was quantitatively calculated with a gamma counter. For the evaluation of cytotoxic effects of the labeled siRNA, microscopic photographs and cell counting were used. Results. ITLC showed that the purity of 177Lu-siRNA complex products were in excess of 95%. The percentage of the transfected 177Lu-siRNA complexes with Lipofectamine was significantly higher compared to that of siPORT Neo FX (P < 0. 01). Cell counting and microscopic photographs indicated that 177lu-siRNA complex targeting IGF-1R had significantly cytotoxic effect on the understudied cells compared to the control groups (P < 0.001). Conclusion. The present study shows that efficiency of the lipofectamine in transfection of the 177Lu-siRNA into colon cancer cells is more than siPORT Neo FX, and 177Lu-siRNA targeting IGF-1R has cytotoxic effect on colon cancer cells.