شناسايي الحاق PLZF-RARa در بيماران با ريخت شناسي

Detection of PLZF-RAR fusion in patients with Acute Promyelocytic Leukemia

زمينه و هدف: لوسمي پروميلوسيتي حاد(APL) با جابجايي كروموزومي t(15:17)( الحاق گر ژن‌هاي PML و RAR?)، همراه است. شواهد سيتوژنتيك و مولكولي اين جابجايي در 90 تا100درصد بيماران با ريخت شناسي APL شناسايي شده است. اين بيماري به صورت ويژه اي به درمان با ATRA حساس بوده و به شيمي‌درماني رايج بخوبي پاسخ مي‌دهد. ناهنجاري t(11;17)(q23;q21) همراه با بازآراييPLZF-RAR? شايع‌ترين جابجايي جايگزين است كه در كمتر از 1% موارد APL ديده مي‌شود. بر خلاف- t(15:17) APL، بلاست‌هاي بيماران داراي باز آرايي PLZF-RAR? به اثرات تمايزي رتينوييدها مقاوم مي‌باشند. بر اين اساس و به منظور تعيين راهبردهاي بهينه درماني، بررسي و شناسايي اين الحاق در تمام بيماران APL تازه تشخيص داده شده، اهميت دارد. هدف از اين مطالعه شناسايي الحاق PLZF-RAR? و PML-RAR? در بيماران با ريخت شناسي APL مراجعه كننده به مركز تحقيقات خون، انكولوژي و پيوند مغزاستخوان بيمارستان شريعتي تهران در سال 1385 است. روش بررسي : نمونه خون محيطي و/يا مغزاستخوان از 200 بيمار با ريخت شناسي AML-M3 و 200 بيمار مبتلا به زيرگروه هاي ديگر AML اخذ شده و سلولهاي تك هسته اي بوسيله سانتريفوژ شيب غلظت فايكول جدا شد. RNA سلولي توسط محلول Trizol يا TriReagent استخراج شده و بوسيله Random Hexamer به cDNA تبديل گشت. PCR با پرايمرهاي اختصاصي براي هر الحاق انجام و محصول PCR بر روي ژل آگارز 2% حاوي 05/0% اتيديوم برومايد الكتروفورز گرديد. يافته‌ها: با استفاده از روش واكنش زنجيره اي پليمراز با رونويسي معكوس( RT-PCR) الحاق PLZF-RAR?در 2 نفر (1%) از بيماران با ريخت شناسي لوسمي پروميلوسيتي حاد شناسايي گرديد. نتيجه گيري: با توجه به نتايج اين تحقيق، RT-PCR يك روش حساس و سريع براي شناسايي ژنهاي الحاقي در لوسمي‌ها بوده و با اين روش امكان تعيين استراتژي صحيح درماني و بدنبال آن، شناسايي حداقل بيماري باقيمانده در بيماران فوق وجود دارد.

Background and Aim: Acute promyelocytic leukemia (APL) is associated with the t(15;17) ,fusing promyelocytic leukemia (PML) and retinoic acid receptor-? (RAR?) genes. This disease is uniquely sensitive to treatment with all-trans retinoic acid (ATRA) and highly responsive to conventional chemotherapy. The t(11;17)(q23;q21) abnormality associated with a PLZF-RAR? rearrangement is the commonest of the alternative translocations accounting for less than 1% APL. Blasts from PLZF-RAR? cases have been found to be resistant to the differentiating effects of retinoids. In this study we aimed to determine the PLZF-RAR? and fusion genes in patients with APL morphology who referred to Hematology-Oncology and BMT research center, Tehran Shariaty Hospital in 2006. Materials & Methods: Peripheral blood and/or bone marrow samples were taken from 200 patients with APL morphology and 200 patients with other subtypes of AML. The mono-nuclear cells were enriched by centrifugation over a ficoll-isopaque gradient. RNA extracted by Trizol or TriReagent and then reverse transcribed to cDNA using random primers. PCR performed using specific primers for each fusion. PCR products electerophoresed on a 2% agarose gel containing 0.05% ethidiume bromide. Results: In 2 (1%) patients with APL-morphology the RT-PCR analysis showed PLZF-RAR? fusion transcripts. Conclusion: It can be concluded that RT-PCR is a rapid and sensitive method for detection of abnormal fusion genes in leukemia and allows the definition of a correct strategy for treatment and subsequent minimal residual disease monitoring. Key words: PLZF-RAR?, PML-RAR?, Acute Promyelocytic Leukemia (APL), RT-PCR