تعيين غلظت آپوپتوزي زهر زنبور عسل بر روي سلول‏هاي سرطاني پروميلوسيتي انساني

Determination of Apoptotic Doses of Bee Venom on Human Promyelocytic Leukemia Cells

هدف: اخيرا محققين گزارش كردند زهر زنبور عسل داراي اثر قوي ضد التهابي، ضد توموري و ضد سرطاني است. از طرفي از اهداف مهم درمان سرطان، راه اندازي آپوپتوزيس است. هدف اين پژوهش، تعيين غلظت آپوپتوزي القا شونده توسط زهر زنبور (پاييزه، از منطقه سمنان) بر سلول‏هاي HL-60 مي باشد. مواد و روش ها: در اين پژوهش تجربي رده‏‏ي سلولي HL-60‌از انستيتو پاستور تهيه و در محيط RPMI 1640 حاوي 10 درصدFBS و 1 درصد پني سيلين- استرپتومايسين كشت شد. 2ساعت بعد كشت، سلول‏ها تحت تاثير غلظت‏هاي مختلف زهر 5/2، 5، 5/7، 12 و 15 ميكروگرم بر ميلي ليتر به مدت 24،48،72 ساعت قرار گرفتند. سپس مورفولوژي سلول‏ها توسط ميكروسكوپ معكوس، درصد بقا توسط سنجش MTT و مرگ سلولي توسط رنگ آميزي هوخست و فلوسيتومتري بررسي شدند. نتايج: آناليز مورفولوژيكي و نتايج حاصل از رنگ آميزي هوخست و داده‏هاي فلوسيتومتري آنتي بادي آنكسين5 نشان داد مرگ القا شده توسط زهر آپوپتوزيس بوده و دوز 12 ميكروگرم بر ميلي‏ليتر موجب القا 50 درصد آپوپتوزيس مي شود. نتيجه گيري: داده‏هاي اين تحقيق نشان داد به كارگيري غلظت‏هاي پايين زهر زنبور طي دوره تيمار 48 ساعت اثر مهار تكثير وابسته به دوز و زمان داشته و دوزهاي بالاتر از 15 ميكرو گرم بر ميلي ليتر باعث ليز شدن سلول‏ها و نكروزيس مي‏شود. نتايج اين پژوهش نشان داد كه دوز 12 ميكرو گرم بر ميلي‏ليتر القا كننده آپوپتوزيس بر سلول‏هاي HL-60 است.

Aim: Recently, researchers have reported that BV (Bee Venom) has a potent anti inflammatory, anti tumor and anticancer effects. Besides, one of the essential aim in cancer therapy is restoring apoptosis. The Objective in this study was determination of apoptotic concentration induced by BV (Autumn, Semnan) on HL60 cancer cells. Material & Methods: In this study, HL60 cells were purchased from the Pasteur Institute in Tehran and were grown in RPMI-1640 medium supplemented with 10% FBS and 1% antibiotics (including penicillin and streptomycin) in the plate. After 2 hours, the cells were exposed by BV concentrations (2.5, 5, 7.5,12,15 µg/ml) for 24, 48, 72 hours. After passing desired time, the morphology of cells was determined under inverted microscope and cell viability was studied by MTT assay and determination of cell death was evaluated by flow cytometery assay and Hoescht staining. Result: The morphological analysis and the results from Hoescht staining & flowcytometery Annexin V antibody exhibited that the cell death induced by BV was significantly apoptosis and bee venom by concentration of 12 µg/ml results in %50 of apoptosis cell death. Conclusion: Our findings from this study showed that using lower dosage of BV during 48h treatment period cause inhibition of proliferation in time and dose dependent manner and higher dosage of 15 µg/ml cause cell lysis and necrosis. Experimental data showed that 12 µg/ml is inducer of apoptosis in HL60 cells. Keywords: Bee Venom, Apoptosis, Annexin V