كلون‌سازي مولكولي ژن‌هاي luxA وluxB باكتري Vibrio fischeri

Cloning of the luxA and luxB genes of Vibrio fischeri

پرتوافكني زيستي در باكتري‌ها پديده‌اي است كه توسط آنزيم‌هاي لوسي فراز سازماندهي مي‌گردد. اين آنزيم‌ها بصورت هترودايمري متشكل از زير واحدهاي ? و B هستند كه توسط ژنهاي luxA و luxB رمز شده و همراه با ژنهاي luxCDE رمز كننده پروتيين‌هاي مورد نياز جهت سنتز سوبستراي آلدييدي، اپران lux باكتريVibrio fischeri را تشكيل مي‌دهند. در تحقيق حاضر ناحيه كروموزومي واجد ژنهاي luxA و luxB باكتري Vibrio fischeri تكثير شده و متعاقبا قطعات تزايد يافته در وكتور pTZ57R كلون گرديدند. تاييد كلونينگ ژنهاي luxA و luxB بواسطه روشهاي PCR و هضم آنزيمي صورت پذيرفت. سرانجام تاييد نهايي ژن‌هاي كلون شده luxA و luxB توسط روش تعيين توالي انجام گرفت كه بترتيب به ميزان 95 و 89 درصد همساني با توالي‌هاي مرتبط در بانك ژني را نشان دادند.

Bacterial bioluminescence is a phenomenon caused by luciferase enzymes. All of these enzymes catalyze the same chemical reactions and are heterodimers composed of an ? and B subunit encoded on adjacent genes, luxA and luxB, together with genes luxCDE which code for a long-chain aliphatic aldehyde, will organize the vibrio fischeri lux operon. In the this study chromosomal fragments contain, luxA and luxB genes of the bacterium vibrio fischeri are amplified and subsequently the amplified fragments have cloned into pTZ57R vector. Cloning has confirmed by the PCR methods and digestion with restriction enzymes EcoRI / BamHI for luxA gene and BglII/KpnI for luxB gene. Results showed that sequenced luxA and luxB genes have 95% and 89% identity with the GenBank. Now luciferase cloned genes after subcloning into suitable expression vectors can be useful as reporters in different biotechnological and research fields.