بررسي ژن aac(6)Ie-aph(2)Ia در ميان سويه هاي باليني انتروكوك و تشخيص سويه هاي مقاوم به سطح بالاي جنتامايسين

Study of aac(6ʹʹ)Ie-aph(2″)Ia Gene in Clinical Strain of Enterococci and Identification of High-Level Gentamicin Resistante Enterococci

مقدمه و هدف : انتروكوكها بعنوان يكي از مهمترين پاتوژنهاي عامل عفونتهاي بيمارستاني ظاهر شده اند.علاوه بر مقاومت هاي ذاتي به بسياري از عوامل ضد ميكروبي ، مقاومت هاي وابسته به پلاسميد و ترانسپوزون را ايجاد مي كنند كه مقاومت به سطح بالاي جنتامايسين (HLGR) از جمله آنها است.HLGR در انتروكوك ها باعث شكست سينرژيسم دارويي يك آمينوگليكوزيد به همراه يك عامل فعال بر عليه ديواره سلولي مي شود. معمولا پيدايش سويه هاي HLGR (MIC?500?g/ml) در اثر حضور ژن aac(6ʹ)-Ie-aph(2")-Ia است. روش كار : در اين مطالعه تجربي در مجموع 142 انتروكوك از بيماران جدا شد .تشخيص گونه انتروكوكها بر اساس تستهاي بيوشيميايي صورت گرفت و تست هاي حساسيت آنتي بيوتيكي به روش انتشار از ديسك انجام شد. براي جدا كردن انتروكوكهاي HLGR از ديسكهاي جنتامايسين(?g 120) استفاده شد. MIC براي جنتامايسين به روش براث ميكروديلوشن تعيين شد. PCR براي شناسايي ژن aac(6?)Ie-aph(2?)Ia و واكنش هضم آنزيمي توسط آنزيم محدودالاثر Sca1 انجام شد.يكي از محصولات PCR تعيين توالي و با سويه استاندارد BLAST شد. نتايج : از 142 سويه 62 (7/43%) آنها HLGR بودند.55 سويه HLGR ، داراي MIC برابر با 1024-512 ميكرو گرم بر ميلي ليتر داشتند. همه سويه هاي HLGR بجز يكي از آنها داراي ژن aac(6ʹ)-Ie-aph(2")-Ia بودند. 42% از مجموع E.faecalis ها و44% از مجموع E.faecium ها ، HLGR بودند . در سويه هاي HLGR شيوع مقاومت به آنتي بيوتيكهاي مورد بررسي و مقاومتهاي چند دارويي ( (MDR در مقايسه با non–HLGR بيشتر بود. شيوع اين مقاومتها در گونه هاي فسيوم بيشتر از فكاليسها بود.محصول PCR تعيين توالي شده با توالي موجود در Genebank مقايسه وتاييد شد. نتيجه نهايي : شيوع بالاي MDR و HLGR مشكل عمده اي در مراكز درماني در ايران مي باشد و گسترش ژن aac(6ʹ)-Ie-aph(2")-Ia مسيول ايجاد اين مقاومت در تهران است

Introduction & Objective: Enterococci have emerged as the leading nosocomial pathogens. In addition to natural resistance to many agents, enterococci have also developed plasmid- and transposon-mediated resistance to high concentrations of aminoglycosides. High-level gentamicin resistance (HLGR) of enterococci results in the failure of drug synergism with an aminoglycoside plus cell-wall-active agents. HLGR (MIC=500?g/ml) strains is usually due to the presence of the aac(6ʹ)Ie-aph(2?)Ia gene . Materials & Methods: In the present experimental study 142 enterococci were isolated from the patients’ species. Identification was done by using standard methods and antimicrobial susceptibility test was performed by disc diffusion technique. MIC of Gentamicin was determined by a broth micro dilution method (NCCLS). PCR was performed to detect the aac(6ʹ)Ie-aph(2?)Ia gene .Presence of the gene aac(6ʹ)-Ie-aph(2?)-Ia was confirmed by digest with Sca1 enzyme. A PCR product was sequenced and BLAST analyzed at the NCBI database to be confirmed. Results: 62(43.7%) out of the 142 isolates, were found to exhibit HLGR phenotype. MIC ranging from 512 to > 1024 ?g/ml in 55 HLGR isolates. All resistant isolates except one, were found to harbor the aac(6ʹ)Ie-aph(2?)Ia gene. In our strain collection, 42% of E. faecalis and 44% of E. faecium were HLGR. In the HLGR isolates the prevalence of resistance to other antibiotics and Multi Drug Resistance (MDR) was higher than non–HLGR.This prevalence in E.faecium was higher than E.faecalis. The sequence was compared with a published sequence and confirmed. Conclusion: Our results indicate that high prevalence of MDR and HLGR enterococcal colonization is an important problem in our medical centers.Spread of the aac(6ʹ)-Ie-aph(2?)-Ia gene was responsible for HLGR among enterococci isolated from the patients in Tehran.