فراواني تيپ emm و فنوتيپ هاي مقاومت به اريترومايسين در استرپتوكوكهاي گروه A جدا شده ازگلودرد هاي چركي درغرب استان مازندران

The prevalence of emm types and Resistance to Erythromycin Patlern among group A Streptococciisolated from the throat in north of Iran

چكيده زمينه و هدف : شناسايي سويه هاي استرپتوكوكوس گروهA (استرپتوكوكوس پيوژنز) عمدتا برپايه روشهاي سرولوژيك ، مبتني برآنتي ژن هاي سطحي TوMبوده وبر اين اساس سروتايپ هاي مختلفي از سراسر جهان گزارش شده است. بدنبال آن تعيين توالي انتهاي آميني ژن emm جايگزين روشهاي قديمي تر شده و براين اساس بيش از150 تيپ emm در سراسر جهان شناخته شده است. هدف اين مطالعه تعيين شيوع تيپ هاي emm دربين جدايه هاي حلقي حاصل از گلودرد هاي چركي و همچنين الگوي مقاومت آنتي بيوتيكي آنها درمناطق غربي استان مازندران طي سالهاي 89-90 مي باشد. روش بررسي:50 جدايه از حلق افراد مبتلا به گلودرد هاي چركي مراجعه كننده به مراكز بيمارستاني مستقر در شمال ايران شامل بيمارستانهاي شهيد رجايي تنكابن، امام سجاد رامسر و طالقاني چالوس طي سالهاي 89-90 به روش كشت در محيط آگار خوندار، آزمايش حساسيت به باسيتراسين، آزمون PYR و همچنين اگلوتيناسيون توسط آنتي سرم هاي اختصاصي شناسايي شدند. حساسيت آنتي بيوتيكي جدايه ها با استفاده از ديسك هاي خريداري شده از شركت پادتن طب ايران، توسط روش كربي باير و تجزيه وتحليل آن بوسيله جدول استاندارد CLSI انجام گرفت. ارزيابي مكانيسم مقاومت به اريترومايسين توسط روش مضاعف ديسكي در حضور اريترومايسين و كليندامايسين انجام شد. ژن emm همه جدايه ها تكثير و محصولات PCR آنها توسط شركت ماكروژن كره تعيين توالي شده و با استفاده از برنامه BLAST2.0 (مركز ملي اطلاعات بيوتكنولوژي ،قابل دسترسي در پايگاه WWW.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)) توالي هاي ژنهاي مورد نظر با توالي هاي منتشره در بانك ژني ، جهت تعيين تيپ emm مقايسه شدند. يافته ها: 4تيپ مختلف emm شناسايي شد. از ميان آنها emm5 فراوانترين بوده(26 مورد، 52%) وبدنبال آن emm12 (12 مورد، 24%) و emm79 و emm86 با فراواني يكسان ( 6مورد، 12%) حضور داشتند. همه آنتي بيوتيك هاي داراي حلقه بتا لاكتام اثر مهاري بر ايزوله ها نشان دادند، در صورتيكه 18% از جدايه ها (9مورد) مقاوم به اريترومايسين بودند. شايع ترين فنوتيپ مقاوم cMLSB (%66.6) وبدنبال آن فنوتيپ M (%33.3) بوده، درحاليكه در هيچكدام از جدايه ها فنوتيپ iMLSB مشاهده نشد. 6 مورد از جدايه ها(%12 ) مقاوم به كليندا مايسين بودند. نتيجه گيري : نتايج حاصل حضور متفاوتي ازتيپ هاي emm جدا شده ازموارد حلقي، نسبت به جدايه هاي ساير نقاط جهان نشان مي دهد، وجود تيپ emm86 درفارنژيت كه در گزارشات قبلي ذكر نشده است حايز اهميت ميباشد. وجود مقاومت آنتي بيوتيكي به اريترومايسين از يافته هاي ارزشمند اين تحقيق مي باشد. واژه هاي كليدي : استرپتوكوكوس پيوژنز ،تيپ emm، اريترومايسين ، iMLSB ، cMLSB

Abstract Background and objectives: Group A Streptococcus (GAS) strains have been identified by serologic methods based on surface protein antigens, T and M. Accordingly, different serotypes have been reported worldwide. Recently, the previous out of date procedures have been replaced by Nterminal emm gene sequence, which has been used in identifying more than 150 emm types. We aimed to determine the prevalence of emm types and phenotypes resistance to erythromycin among streptococci isolated from the throat in north of Iran. Material and Methods: 50 GAS isolates from sore throat of patients referred to a few local hospitals in Tonekabon, Ramsar, and Chalus in northwest of Iran (2010-2011), by using blood agar, bacitracin sensitivity test, PYR test and agglutination by specific antiserum. Antibiotic resistance of the isolates was determined by the discs branded by Iranian Padtan Teb Company, using Kirby Bauer Test, and analyzed by CLSI standards. The mechanism of resistance to erythromycin was evaluated by Double Disk Diffusion Test in the presence of erythromycin and clindamycin. mme gene of all isolates were reproduced and their PCR products sequenced by the Korean Macrogen company. To determine the emm types, using BLAST2.0 program (National Center for Biotechnology Information, available in WWW.ncbi.nlm.nih.gov / BLAST), and the emm gene sequences were compared with sequences in the gene bank. Results: we identified Four different types of emm, including e mm5 (26; 52 %), emm12 (12; 24%), emm79 (6; % 12) and emm86 (6; % 12). All beta lactam antibiotics have inhibitory effect on isolates, while18% of isolates (9 of 50) are resistant to erythromycin. The most common resistance phenotype is cMLSB (% 66.6) and the next one is phenotype M (% 33.3), but phenotype iMLSB is not observed in none of the isolates. Twelve percent (6cases) of isolates are resistant to clindamycin. Conclusion: The results of present study show different types of GAS than those reported worldwide. The emergences of emm86 in pharyngitis and erythromycin resistance are the two valuable findings of this research. Keywords:Streotococcus pyogenes,erythromycin,cMLSB,iMLSB