مقايسه تاثير دو روش كشت سلولي بر مورفولوژي و تمايز سلول هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از مغز استخوان جوجه

Impacts of cell culture methods on proliferation, morphology and differentiation of chicken bone marrow-derived mesenchymal stem cells

زمينه: نظر به اهميت عملي جداسازي و كشت سلول هاي بنيادي، اين مطالعه بر روي سلول هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان جوجه انجام شد. هدف: اين مطالعه به منظور تعيين اثر روش هاي جداسازي و كشت سلولي بر مورفولوژي و تمايز سلول هاي حاصل انجام شد. مواد و رو ش ها: اين مطالعه تجربي در سال 1388 در انستيتو پاستور ايران انجام شد، ابتدا 1 ميلي ليتر مغز استخوان آسپيره شده از درشت ني جوجه هاي نژاد Raf (گوشتي) با سن متوسط 2 هفته، به روش كشت مستقيم (بدون حذف گلبول هاي قرمز) و روش بارگيري بر فايكول (به منظور حذف گلبول هاي قرمز) در محيط كشتDMEM با درصد گلوكز پايين، سرم جنين گاوي %10، پني سيلين و استروپتومايسين كشت شد. سپس سلول هاي پاساژ 4 حاصل از دو سيستم كشت، از لحاظ مورفولوژي، تمايز به استخوان، چربي و غضروف مقايسه شدند. داده ها با آزمون آماري آنوواي يك طرفه تحليل شدند. يافته ها: در سيستم كشت مستقيم در مقايسه با سيستم كشت با روش بارگيري بر فايكول، كلون زايي بيش تري اتفاق افتاد و اغلب سلول ها مورفولوژي فيبروبلاستي داشتند. سلول هاي حاصل از روش كشت مستقيم به ترتيب 21، 27 و 40 درصد بيش تر به استخوان، غضروف و چربي تمايز يافتند. نتيجه گيري: نتايج نشان داد كه جداسازي و تكثير سلول هاي بنيادي مزانشيمي با سيستم كشت مستقيم، روش مناسب تري براي تخليص سلول هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان جوجه محسوب مي شود.

Background: By attention to the practical importance of the stem cells screening and culture, this study was conducted on chicken bone marrow mesenchymal stem cells. Objective: This study was performed to determine the effect of screening and cultural methods on the cell morphology and differentiation. Methods: This was an experimental study carried out at Pasture institute in 2009. One milligram aspirated bone marrow from tibia of a two-week old Raf chicken was cultured in low-glucose DMEM, 10% FBS, penicillin and streptomycin using both direct (without RBC removal) and Ficol (with RBC removal) mounted culture methods. After 4 passages, the bone marrow cells of two cell culture methods were compared for their morphology and differentiation into bone, cartilage, and adipose. Data were statistically analyzed by ANOVA test. Findings: In direct cell culture, more colonization compared with Ficol mounting method, was observed and most cells showed fibroblastic morphology. Also, the results were indicative of higher yields of differentiation into bone (21%), cartilage (27%), and adipose (40%) in direct method. Conclusion: According to our results, the application of direct culturing system for screening and proliferation of mesenchymal stem cells seems to be a better protocol to screen the chicken bone marrow mesenchymal stem cells compared to Ficol mounting method.