ارزيابي روش PCR جهت تشخيص آلودگي به باكتري سالمونلا انتريتيديس در محصولات ماكيان در شهرستان كرج

Diagnostic value of PCR method for detection of Salmonella enteritidis contamination in poultry products in Karaj

سابقه و هدف: باكتري سالمونلا انتريكا سرووار انتريتيديس يكي از سويه هاي شايع درگير كننده ماكيان است كه از طريق مواد غذايي آلوده قابل انتقال به انسان مي باشد. در اين مطالعه از روش PCR براي تشخيص باكتري سالمونلا انتريتيديس در محصولات ماكيان استفاده شد. روش بررسي: در اين پژوهش بنيادي، 80 نمونه از محصولات ماكيان از مراكز عرضه در شهرستان كرج و توابع آن تهيه گرديد. DNA نمونه ها به روشsalting out استخراج شد و PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي مربوط به ژن سنتز تاژك به عنوان توالي هدف و سويه استاندارد سالمونلا انتريتيديس (1621 RTCC) به عنوان كنترل مثبت بهينه سازي و انجام گرديد. يافته ها: بررسي محصولات PCR به روش الكتروفورز نشان از تشكيل قطعه 250 جفت بازي و آلودگي به سالمونلا انتريتيديس در 16 مورد از نمونه هاي گوشت مرغ (40 درصد) و 9 مورد از نمونه هاي تخم مرغ (23 درصد) داشت. در آزمون تعيين ويژگي، نتيجه تست در مورد 6 باكتري روده اي ديگر از ساير سويه ها و جنس ها منفي گرديد و حساسيت روشPCR در اين بررسي در سطح DNA ژنومي fg 100 تعيين شد. نتيجه گيري: اين مطالعه نشان داد كه با توجه به محدوديت ها و مشكلات روش هاي جداسازي آزمايشگاهي مي توان از روش PCR به عنوان روشي حساس و سريع در تشخيص آلودگي نمونه هاي غذايي به باكتري سالمونل انتريتيديس استفاده كرد

Background: Salmonella enterica serovar Enteritidis which involves poultry is transmitted by food. The aim of this survey was to optimize PCR method in order to detect Salmonella enteritidis in poultry products. Materials and methods: In this basic research, 80 samples (40 broiler meat and 40 egg samples) were obtained from distribution centers in Karaj and suburb. Following the DNA extraction of the samples, PCR was optimized and performed using standard strain of Salmonella enteritidis (RTCC1621) as positive control and primers against the flagella coding sequence of Salmonella Enteritidis genome. Results: The analysis of the PCR products by agarose gel electrophoresis indicated the amplification of 250 bp segments in 16 out of 40 (40%) broiler meat and 9 out of 40 (23%) egg samples. The sensitivity of the PCR at the DNA level was found to be 1pg and the specificity of the PCR was determined using 6 other entric Gram negative bacteria and found to be positive only for Salmonella enteritidis. Conclusion: This study confirmed that PCR provides sensitive, specific and rapid approach for detection of Salmonella enteritidis in food samples