كلونينگ و بيان پروتيين فاكتور رشد جفتي-1 انساني (hPLGF-1) در سيستم بياني Rosetta E.coli

Cloning and expression of placental growth factor protein of human -1 (hPLGF-1) in Rosetta E.coli expression system

سابقه و هدف: آنژيوژنزيس يا شكل گيري عروق خوني جديد در شرايط فيزيولوژيك و پاتولوژيك مهم ترين عامل رشد و تكثير سلول-ها است. پروتيين PLGFيا فاكتور رشد جفتي يكي از مهم ترين پروتيين ها در تحريك آنژيوژنزيس است. در اين پژوهش، ژن PLGF-1 انساني از بافت جفت جدا شده و پروتيين مورد نظر در سيستم باكتريايي بيان شد. روش بررسي: دراين مطالعه تجربي، ناحيه كد كننده ژن PLGF-1 از بافت جفت انسان توسط پرايمرهاي اختصاصي تكثير شد. قطعه ژني مورد نظر در پلاسميدهاي pET28a و pET32a كلون شد. پلاسميدهاي نوتركيب pET28a-PLGF-1 و pET32a-PLGF-1 به باكتري E.coli Rosetta منتقل شدند و بيان پروتيين نوتركيب توسطIPTG القا گرديد. بيان پروتيين نوتركيب و محلوليت آن با SDS-PAGE بررسي و با روش وسترن بلاتينگ هويت آن تاييد شد. يافته ها: مراحل طراحي و ساخت سازه ژني pET28a-PLGF-1 و pET32a-PLGF-1 با موفقيت انجام و توالي ژن PLGF-1 تاييد گرديد. باكتري هاي القا شده با IPTG پروتيين PLGF-1 را بيان كردند و توسط وسترن بلاتينگ به تاييد رسيد. همچنين پروتيين نوتركيب PLGF-1 تقريبا به صورت نامحلول بيان شد. نتيجه گيري: پروتيين PLGF-1 به خوبي در سيستم بياني RosettaE.coliبيان مي شود و مي توان از اين پروتيين نوتركيب در تست-هاي مختلف استفاده نمود.

Background: Angiogenesis or new blood vessels generation is the most important factor affecting cell growth and proliferation in physiologic and pathologic conditions. Placenta Growth Factor (PLGF) is one of the important proteins for angiogenesis induction. In this study, placenta-derived PLGF-1 cDNA was cloned and expressed in Escherichia coli expression system. Materials and methods: In this experimental study, the human placenta-derived PLGF-1 gene was amplified using specific primers and was cloned into pET32a and pET28a expression vectors. In order to express target protein, pET32a-PLGF-1 and pET28a-PLGF-1 constructs were transformed into E.coli Rosetta. PLGF-1 expression was induced by IPTG, and then the yield of expressed protein and its solubility was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting assay. Results: The pET32a-PLGF-1 and pET28a-PLGF-1 constructs were confirmed by sequencing. The bacterial lysates derived from IPTG-induced samples showed exact proteinand confirmed by western bloting. The majority of the expressed protein was insoluble. Conclusion: The PLGF-1 is well expressed in Rosetta E.coli system and it could be used in different project.