گزارش جهش جديد در ژن Retinoblastoma1 (RB1) در يك بيمار ايراني مبتلا به رتينوبلاستوما و تاثير آن روي پيرايش mRNA

Report of a novel mutation in RB1 gene from an Iranian retinoblastoma patient and its effect on splicing pattern of mRNA

زمينه و هدف: رتينوبلاستوما شايع ترين تومور جامد درون چشمي در كودكان زير شش سال است. جهش در هر دو نسخه ژن Retinoblastoma1 (RB1) مسيول شكل گيري اين بيماري مي باشد. طيف وسيعي از جهش ها تاكنون در سرتاسر ژن RB1 گزارش شده است. بسياري از جهش هاي نقطه اي گزارش شده در ژن هاي انسان، علي رغم نوع آنها، وضعيت پيرايش را دستخوش تغيير مي كنند. در اين مطالعه جهش جديد در ژن RB1 در يك بيمار مبتلا به رتينوبلاستوما معرفي و تاثير آن روي پيرايش mRNA بيان مي شود. گزارش مورد: در مطالعه حاضر، آناليز جهش ژن RB1 بر روي يك بيمار ايراني مبتلا به فرم تك گير و يك طرفه رتينوبلاستوما (دختر بچه 4 ساله) با استفاده از تعيين توالي نواحي كد كننده و همچنين Multiplex Ligation dependent of Probe Amplification (MLPA) انجام گرفته است. در ادامه با استفاده از روش RT-PCR وضعيت پيرايش mRNA ژن RB1 نيز مورد بررسي قرار گرفت. در نتيجه اين بررسي ها يك جهش هم معني (g.70320C > T) در نزديكي انتهاي اگزون 12 شناسايي شد. اين تغيير نوكليوتيدي، توالي مورد توافق يك عنصر افزاينده پيرايش، كه محل اتصال پروتيين SC-35 مي باشد را از بين مي برد. بررسي ساختاري cDNA اين بيمار نشان دهنده اختلال در فرايند پيرايش و حذف اگزون 12 از رونوشت بالغ ژن RB1 است. نتيجه گيري: بر اساس يافته هاي اين مطالعه مي توان تغيير هم معني فوق را تحت عنوان يك جهش پاتوژن جديد در نظر گرفت، همچنين براي اولين بار وجود يك توالي مورد توافق افزاينده پيرايش، در اگزون 12 ژن RB1 گزارش مي شود

Background and aims: Mutations in RB1 gene may lead to retinoblastoma which is the most common solid intraocular tumor in under-six year old children. To date, a wide spectrum of the mutations has been reported in the splicing of RB1 which either affect splicing sequences or splicing regulatory elements. This report introduces a new mutation in RB1and its influence on the splicing of mRNA. Case report: In the present survey, mutation analysis was done in an Iranian patient with sporadic unilateral retinoblastoma using direct sequencing and MLPA. Also, RB1 gene splicing pattern was analyzed by RT-PCR method. As a result, a same-sense nucleotide change (g.70 320C > T) was found near the 5ʹ end of exon 12. This alteration disrupts the consensus sequence of an exonic splicing enhancer and changes the binding site of SC-35 protein. Structural analysis of cDNA in this patient showed the disruption of normal splicing pattern and the skipping of exon 12 from the RB1 transcript. Conclusion: Based on these findings, it may be reasonable to conclude that the above nucleotide change could be a pathogenic mutation. Also, for the first time we report an evidence for the presence of an exonic splicing enhancer in the exon 12 of the RB1 gene.