به‏كارگيري روش Semi Nested-PCR-RFLP براي تشخيص و تعيين ژنوتيپ GB ويروس C در بين افراد آلوده به عفونت ويروس هپاتيت B

Application of Semi-nested PCR RFLP for Detection and Genotyping GBV-C among HBV-infected Patients

هدف: GB ويروس C جز ويروس‏هاي منتقل شونده از راه خون، فرآورده‏هاي خوني و از طريق جنسي است و از آن‏جا كه راه انتقال آن با ويروس‏هاي عامل هپاتيت مشترك است، طي اين مطالعه ويروس را در بين افراد HBsAg مثبت با روش حساس‏تر Semi Nested-PCR جداسازي كرده و ژنوتيپ‏هاي ويروس با روش RFLP تعيين شد. مواد و روش‏ها: در تحقيقي كه به‏صورت مقطعي بين سال‏هاي 1389 تا 1390، روي 100 نمونه سرمي افراد HBsAg مثبت انجام شد، پس از طراحي آغازگرهاي اختصاصي GB ويروس C و بهينه‏سازي روش Semi Nested-PCR، توالي‏هاي محصول PCR براي تعيين ناحيه هضم آنزيمي با استفاده از نرم‏افزارهايي مانند Neb Cutter بررسي و آنزيم‏هاي مناسب براي عمل RFLP انتخاب شد. نتايج: با توجه به نتايج به‏دست آمده مشخص شد كه روش به‏كار رفته براي تشخيص و جداسازي GB ويروس C و تعيين ژنوتيپ‏هاي آن از كارآيي قابل قبولي برخوردار بوده و در مقايسه با ساير روش‏ها به هزينه كمتري براي انجام آزمون نياز دارد. نتيجه‏گيري: در اين تحقيق مشخص شد كه ميزان آلودگي به اين ويروس در افراد مبتلا به عفونت ويروس هپاتيت B در ايران بالا بوده و ژنوتيپ در گردش GB ويروس C در جمعيت مورد مطالعه، ژنوتيپ 2 است. نتايج به‏دست آمده نشانگر اين مطلب است كه الگوي ژنوتيپ در اين مطالعه مشابه با الگوي ژنوتيپ‏هاي غالب در اروپا و آمريكا است.

Objective: GBV-C is a virus transmissible via blood transfusion and sexual routes. Because of the shared transmission routes in GBV-C and hepatitis B virus (HBV) we have attempted to detect GBV-C in HBsAg-positive patients using the more sensitive semi-nested PCR. We used restriction fragment length polymorphism (RFLP) to determine genotype. Methods: A total of 100 serum samples were collected from HBsAg-positive patients from 1389-1390. After designing specific primers and optimizing the semi-nested PCR, sequences of PCR products were analyzed by Neb Cutter software. Restriction enzyme sites were determined and suitable enzymes selected for RFLP. Results: Semi-nested PCR shows acceptable sensitivity for the detection of GBV-C and its genotype determination. This technique is more affordable than other techniques. Conclusion: There appears to be a high rate of GBV-C infection among Iranian HBV patients. In this study, the majority of patients co-infected with GBV-C were of HBV genotype 2, which is similar to the pattern seen in the US and Europe.