بررسي پراكندگي ميتوكندري تخمك موش در مراحل مختلف تكوين با استفاده از ميكروسكوپ كانفوكال

Evaluation of mouse oocyte mitochondrial distribution in different developmental stages using confocal microscopy

هدف: ميتوكندري يكي از مهم‏ترين اندامك‏هاي سيتوپلاسمي است و با توجه به اهميت ميتوكندري در تكوين تخمك، در اين مطالعه با به‏كارگيري ميكروسكوپ ليزر كانفوكال به بررسي و مقايسه پراكندگي ميتوكندري تخمك موش در سه مرحله تكويني ژرمينال وزيكول، شكست ژرمينال وزيكول يا متافاز يك و متافاز دو پرداخته شد. مواد و روش‏ها: پس از تحريك تخمك‏گذاري موش‏هاي سوري نژاد FVB/N با سن 6-7 هفته با 5/7 واحد PMSG تخمك‏ها در مراحل ژرمينال وزيكول و شكست ژرمينال وزيكول يا متافاز يك و متافاز دو از تخمدان‌، با استفاده از روش مكانيكي جداسازي شدند. سپس تخمك‏ها با محلول رنگ JC-1يا 5,5´,6,6´-tetrachloro-1,1,3,3´-tetraethylbenzimidazolycarbocyanine iodide (1 ميكروگرم بر ميلي‏ليتر) به‏مدت 10 دقيقه در 37 درجه سانتي‏گراد رنگ‏آميزي شدند و بعد نمونه‏ها در زير ميكروسكوپ ليزر كانفوكال با طول موج 515- 530 نانومتر براي رنگ سبز مشاهده شد. نتايج: در تخمك مرحله شكست ژرمينال وزيكول و متافاز دوم الگوي نسبتاً يكنواخت ديده شد و ميتوكندري‏ها به شكل نقاط سبز رنگ در تمام سيتوپلاسم به شكل يكسان پراكندگي داشتند اما در تخمك ژرمينال وزيكول الگوي غيريكنواخت به چشم مي‏خورد و تعدادي از ميتوكندري‏ها به شكل حلقه در اطراف هسته تخمك قرار گرفته بودند. نتيجه‏‏گيري: نتايج تحقيق حاضر به‏طور كلي دو الگوي توزيع ميتوكندري در تخمك موش در مراحل مختلف تكويني نشان داد. به‏نظر مي‏رسد كه يكي از اصلي‏ترين عوامل در نحوه پراكندگي ميتوكندري درون سلول نياز مناطق مختلف سلول به توليد ATP و مصرف انرژي باشد.

Objective: Mitochondria is a critical organelle within the cell and has important role in the oocyte development, thus the aim of this study was the comparison of mitochondrial distribution within the mouse oocyte at germinal vesicle (GV), germinal vesicle breakdown (GVBD) and metaphase II (MII) stages using laser confocal microscopy (LSCM). Materials and Methods: After superovulation of adult mouse (FVB/N) using 7.5 IU PMSG the oocytes at GV, GVBD and MII were collected mechanically from the ovary then they were stained with (1 microgram per 1 ml) 5,5´6,6´-tetrachloro-1,1,3,3´tetraethylbenz-imidazolycarbocyanine iodide or JC-1 for ten min at 37?C. Then they were observed under LSCM at 515-530 nm wavelengths for green light. Results: Our observation showed the mitochondria were distributed homogenously within the cytoplasm of GVBD and MII oocytes as green staining but they were heterogeneously within the GV oocytes and some of them were located around the oocyte nucleus as a ring. Conclusion: Our results showed two mitochondrial distribution patterns within the mouse oocytes at different developmental stages. It seems that the main factors for distribution of mitochondria within the cells is their need for producing ATP and usage of the energy.