استفاده از روش‌هاي كلاسيك و مولكولي در رديابي Armillaria mellea عامل بيماري پوسيدگي ريشه و طوقه درختان از خاك و چوب *‌

APPLICATION OF CLASSICAL AND MOLECULAR TECHNIQUES IN DETECTION OF Armillaria mellea THE CAUSAL AGENT OF ROOT AND CROWN ROT DISEASE FROM SOIL AND WOOD

قارچ Armillaria melleaعامل پوسيدگي ريشه و طوقه درختان داراي انتشار جهاني است و خسارت قابل توجهي را به دامنه وسيعي از درختان باغي، جنگلي و فضاي سبز وارد مي‌سازد. قارچ عامل بيماري مي تواند به عنوان يك منبع آلودگي در زير پوست باقي بماند و از سويي كنترل موثري عليه اين بيماري وجود ندارد، بنابراين رديابي بيمارگر از خاك و طوقه درختان در پيش بيني شدت آلودگي قارچي و جلوگيري از پراكنش به درختان مجاور اهميت دارد. در اين تحقيق به منظور دستيابي به يك روش حساس و سريع جهت رديابي A. mellea در نمونه هاي خاك و چوب، نمونه‌برداري از اندام بارده قارچ، خاك و طوقه درختان انجام گرفت و پس از جداسازي عامل بيماري روي محيط كشت، مقايسه اي ميان روش هاي مختلف رديابي بيمارگر با استفاده از محيط هاي كشت نيمه انتخابي، گياه تله و روش مولكولي صورت گرفت. مايه تلقيح بيمارگر براي دو جدايه A. mellea تهيه و به ميزان سه درصد به خاك تلقيح گرديد و سپس رديابي بيمارگر با استفاده از سه روش محيط كشت، تله‌گذاري و nested PCR به‌طور همزمان، انجام گرفت. روش محيط كشت نيمه انتخابي در رديابي بيمارگر در دراز مدت كارايي نداشت. در روش تله گذاري از گياه شمعداني استفاده گرديد كه به مدت زمان طولاني جهت رديابي بيمارگر از خاك نياز داشت. براساس نتايج به‌دست آمده، روش nested PCR در رديابي بيمارگر كارآمد تشخيص داده شد.

Armillaria mellea the causal agent of root and crown rot of trees has a universal distribution and causes extensive economic disease on a broad host range of trees in gardens, forests and urban environments. The pathogen can survive under the bark as inoculum and there is no effective control method against the disease, so pathogen detection from soil and wood is important to predict disease severity and prevent disease dispersal from one tree to another. To achieve a rapid and sensitive detection method for A. mellea in soil and wood, sampling was performed from fruiting bodies, soil and wood and after isolation of pathogen on culture media, comparison was done among different detection methods using a semi-selective medium, baiting and molecular methods. Inoculum was prepared for two isolates of A. mellea and was inoculated to soil. Pathogen detection was done with soil direct culture method, baiting and nested PCR simultaneously. The culture medium was not effective to detect pathogen in long-term period. In baiting method, Pelargonium hortorum was used as a baiting plant that required long time to detect pathogen. The results revealed that nested PCR is an efficient method for detection of A. mellea.