جداسازي آنزيم لاكتوپراكسيداز از شير شتر و بررسي اثرات آنتي باكتريال آن بر عليه باكتري استافيلوكوكوس اوريوس

Isolation of Lactoperoxidase Enzyme from Camels’ Milk and Survey Its Antibacterial Effects against Staphylococcus aureus

آنزيم لاكتوپراكسيداز در غدد پستانداران مختلف و ترشحات آن‌ها وجود دارد. سيستم لاكتوپراكسيداز يك سيستم ضدميكروبي طبيعي در شير مي‌باشد كه شامل آنزيم لاكتوپراكسيداز- پراكسيد هيدروژن و تيوسيانات مي‌باشد كه اين سيستم اكسايش تيوسيانات توسط پراكسيد هيدروژن به عامل آنتي باكتريال هيپوتيوسيانات كه باعث مهار رشد باكتري‌ها مي‌شود، را كاتاليز مي نمايد. در اين بررسي آنزيم لاكتوپراكسيداز از شير شتر استخراج شد و چربي لاكتوپراكسيداز شير شتر با استفاده از سانتريفيوژ يخچالدار °C) 4 در دور rpm2500) برطرف شد. استخراج آنزيم لاكتوپراكسيداز از شير شتر با استفاده روش‌هاي كروماتوگرافي تعويض يوني با سفادكسCM C-50 و كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون سفادكس G100انجام گرديد و فعاليت آنزيم لاكتوپراكسيداز توسط تترامتيل بنزيدين اندازه‌گيري شد و براي تعيين وزن مولكولي از روش SDS PAGE استفاده گرديد. ضريب ثابت ميكاييليس براي اين آنزيم برابر با mM268/0 و Vmax برابر باµmol/ ml min , 5-10×9/14 بدست آمده است. سيستم كامل شامل آنزيم لاكتوپراكسيداز- پراكسيدهيدروژن و تيوسيانات مي‌باشد كه اثر ضدباكتريايي اين سيستم بر روي باكتري استافيلوكوكوس اوريوس بررسي شد. براي اين منظور انكوباسيون باكتري‌ها تحت شرايط سيستم كامل به مدت360دقيقه انجام گرديد. نتايج نشان داد كه اثر ضدباكتريايي سيستم كامل بر باكتري استافيلوكوكوس اوريوس برابر با70% مي‌باشد و اين نتيجه در مقايسه با شاهد داراي اختلافي معني‌دار مي‌باشد.

Lactoperoxidase enzyme is present in various mammalian glands and in their secretions. The lactoperoxidase system is a natural anti-microbial system in milk which results from the interaction between three components; the enzyme lactoperoxidase, thoicyanate ion and hydrogen peroxidase. Hydrogen peroxidase catalyzes the oxidation of thiocyanate to turn it into the antibacterial hypotiocyanate that, in turn, inhibits the growth of bacteria. Lactoperoxidase enzyme was extracted from the milk of camel. Camel milk was centrifuged at 2500 rpm at 4°C for 15 min to remove fat. Camel lactoperoxidase was extracted from raw milk using CM sepHadex C-50 ion exchange chromatography? and sephadex G-100 gel filtration chromatography. The activity of lactoperoxidase was measured by using tetramethylbenzidin as achoromogenic substrate. The determination of molecular weight for the extracted enzyme was controlled with SDS-PAGE .Km value for lactoperoxidase was 0.268 mM. Vmax value was 0/000149 µmol/ ml min. The antibacterial system was prepared. The complete system constituted lactoperoxidase? H2O2? and tiocyanate .The antibacterial complete system effect was measured on the Staph aureus bacteria. For this purpose, the bacteria were incubated under complete system condition for 360 min. The findings indicated that the antibacterial complete system effect on Staph aureus was 70%. These results showed a significant difference as compared to the control.