دامنه ميزباني و برخي مشخصات مولكولي تعدادي از جدايه هاي ويروس موزاييك يونجه در استان كرمان

Host Range and Partial Molecular Characterization of Alfalfa Mosaic Virus Isolates in Kerman Province

ويروس موزاييك يونجه (Alfalfa mosaic virus, AlMV) يكي از مهم ترين ويروس هاي يونجه در سرتاسر دنياست. به منظور مطالعه جدايه هاي اين ويروس در استان كرمان، در طي سالهاي 1386 تا 1387 از 514 بوته يونجه با علايم موزاييك، زردي، تاولي شدن سطوح برگ ها، بدشكلي و پيچيدگي و 66 بوته سيب زميني با علايم زرد ابلقي (Calico)، در شهرستان هاي مختلف استان كرمان نمونه برداري به عمل آمد. آلودگي نمونه هاي فوق به AlMV با استفاده از آزمون سرولوژيكي الايزاي غير مستقيم (Indirect ELISA) و واكنش RT-PCR با استفاده از جفت آغازگر اختصاصي چارچوب ژني پروتيين پوششي (CP) اثبات گرديد. در مطالعات بيولوژيكي، نمونه هاي آلوده در شرايط گلخانه بر روي گياهان محك مايه زني گرديدند. جدايه هاي مختلف، در ارقام مختلف توتون (Nicotiana tabacum L.) علايم بسيار متنوعي ايجاد كردند و در بوته هاي داتوره (Datura maxima) فقط دو جدايه Ke. Si. Al و Ke. Ba. Al علايم ويروسي متفاوتي به ترتيب به صورت ايجاد علايم توته اي و لكه هاي موضعي نكروز ايجاد نمودند. از بين جدايه هاي جمع آوري شده، چهار جدايه (شامل سه جدايه يونجه و يك جدايه سيب زميني) براساس موقعيت جغرافيايي به منظور مطالعات مولكولي انتخاب گرديدند. واكنش RT-PCR با استفاده از جفت آغازگر اختصاصي پروتيين پوششي ويروس منجر به تكثير قطعه اي به طول 780 جفت باز شد. پس از همسانه سازي جدايه هاي ايراني، تعيين ترادف و مقايسه آنها با ناحيه متناظر از جدايه هاي موجود در بانك ژن، بيانگر درصد تشابه بالا در ترادف اسيد نوكلييك (3/98-9/92%) و اسيد آمينه ترجمه شده از ترادف نوكليوتيدي (100- 9/91%) بين جدايه هاي ايراني با جدايه هاي ايتاليايي اين ويروس بود. در درخت فيلوژنتيكي رسم شده براساس ترادف نوكليوتيدي ناحيه CP، جدايه هاي AlMV مورد بررسي در اين تحقيق و جدايه هاي ايتاليايي در يك شاخه و جدايه هاي فرانسوي در شاخه اي جداگانه قرار گرفتند. بررسي بيولوژيكي و تعيين جايگاه فيلوژ

Alfalfa mosaic virus (AlMV) is one of the most conspicuous alfalfa viruses in the world. In order to identify the distribution, host range and molecular characterization of Alfalfa mosaic virus in Kerman province, 514 alfalfa samples showing mosaic, Calico, mottle and malformation symptoms as well as 66 potato samples showing calico symptoms were collected from alfalfa and potato fields in Kerman, Jiroft, Kahnooj, Shahrbabak, Baft, Sirjan and Bardsir regions, Kerman Province. Infection of samples was analyzed through, enzyme-linked immunosorbent assay. In host range studies, AlMV isolates induced different symptoms on several varieties of Nicotiana tabacum L. From among all the Iranian AlMV isolates, only two, namely: Ke. Si. Al, and Ke. Ba. Al caused different viral symptoms including enation and necrotic local lesions on Datura maxima, respectively. As Based on geographical location and biological properties, four isolates were selected for molecular investigation. The whole Coat Protein (CP) gene from four AlMV isolates (three alfalfa and one potato isolate) were PCR-amplified, cloned, sequenced and compared with the counterpart sequences available in the GeneBank. The CP gene of four Iranian isolates of AlMV showed nucleotide and amino acid sequence identities in the ranges between 92.9-98.3 and 91.9-100%, respectively. In phylogenetic analysis, all the four Iranian AlMV isolates were clustered in the Italian group. This is the first report on biology and CP sequence analysis of AlMV isolates from Kerman province in Iran.