كلونينگ و بيان قطعه اي از ژن POMP90 كلاميدوفيلا ابورتوس سويه 3/26 در اشرشيا كلي

Cloning and expression of Chlamydophila abortus segment of POMP90 gene coding in E. coli

كلاميدوفيلا ابورتوس يكي از عوامل مهم ايجاد سقط عفوني در گوسفند در سراسر جهان مي باشد. دفع اين ارگانيسم از طريق ترشحات رحمي و جفت آلوده در هنگام زايمان باعث آلودگي محيط و انتقال آن به حيوانات حساس و انسان مي گردد. تا كنون مطالعات مختلفي جهت تهيه آنتي ژن هاي نوتركيب اين باكتري براي استفاده در ELISA صورت گرفته است. در اين مطالعه قطعه اي با طول375 bp از ناحيه كد كننده ژن پروتيين پلي مورفيك غشا خارجي POMP90 (از اسيد آمينه Tyr113 تا اسيد آمينه Asn238) كلاميدوفيلا ابورتوس سويه 3/26 با PCR تكثير داده شد و پس از كلونينگ در وكتور pMAL-C2X در باكتري اشرشياكلي BL-21 بيان گرديد. پروتيين هدف با وزن 55 KDa از طريق SDS-PAGE و متعاقب آن ايمونوبلاتينگ مورد ارزيابي قرار گرفت. مشاهده بيان پروتيين با وزن ملكولي قابل انتظار در SDS-PAGE و واكنش مثبت اين پروتيين با سرم گوسفند آلوده به كلاميدوفيلا ابورتوس در ايمونوبلات نشان دهنده بيان موفق اين قطعه از پروتيين POMP90 در E. coli بود.

Chlamydophila abortus is one of the major causes of infectious abortion in pregnant sheep worldwide. Organisms shed in infected placentas and uterine discharges at lambing time are the main sources of environmental contamination, responsible for transmission to susceptible animals and possible human contacts. In this study one segment with 375 bp length of POMP90 gene coding region of Chlamydophila abortus S26/3 (Tyr113-Asn238) was amplified with PCR and expressed in E.coli BL-21, after cloning in pMAL-C2X vector. The recombinant 55 kDa protein was identified by both SDS-PAGE and immunoblotting. Expression of a protein with the expected molecular weight in SDS-PAGE and a positive reaction of the protein with Chlamydophila abortus infected sheep sera by immunoblotting, revealed a successful expression of POMP90 gene segment in E. coli.