مطالعه آلودگي به نيوسپورا كانينوم با استفاده از روش اليزاي خانگي استاندارد شده در گاوهاي شيري اطراف تبريز

The study of infestation to Neospora caninum using the standardized domestic ELISA in dairy cows in suburb of Tabriz

نيوسپوروزيس (Neosporosis) بيماريي است كه عامل آن تك ياخته‌اي به نام نيوسپورا كانينوم (Neospora caninum) مي‌باشد كه با ايجاد سقط جنين در گاو و همچنين فلج عصبي و عضلاني اندام‌هاي مختلف به خصوص اندام‌هاي خلفي سگ شناخته مي‌شود. اين بيماري براي اولين بار در سال 1984 در نروژ مورد شناسايي قرار گرفت. روش‌هاي سرولوژيك مختلفي مانند (ELISA) براي تشخيص اين بيماري وجود دارند. هدف از اين بررسي ارزيابي اليزاي خانگي براي تشخيص اين بيماري در گاوان سقط كرده اطراف تبريز و مقايسه نتايج آن با روش اليزاي تجاري بوده است. بدين منظور تاكي‌زوايت‌هاي نيوسپورا كانينوم ليز شده و با رقت‌هاي مختلف توسط بافر كوتينگ در كف گوده‌هاي اليزا قرار گرفتند. سپس از رقت‌هاي مختلف سرم كنترل مثبت و با روش چكر بورد اقدام به طراحي اليزا شد. آنتي‌بادي ثانويه (بز ضد گاو) كونژوگه شده با HRP (Horse Radish Peroxidase) در كف گوده‌ها قرار گرفت. نتايج نشان داد كه استفاده از يك و نيم ميكروگرم از آنتي‌ژن در هر گوده و رقت يك به صد از سرم‌هاي مثبت مي‌تواند بهترين نتايج را ارايه نمايد. از يك اليزاي تجاري نيز به عنوان آزمون مرجع براي محاسبه حساسيت و ويژگي نسبي اليزاي خانگي استفاده شد و براي برقراري يك حد مرزي (Cut-Off) روش‌هاي آماري و رسم منحني ROC بكار گرفته شد. با در نظر گرفتن حد مرزي 30/0 حساسيت و ويژگي نسبي به بهترين شكل به دست آمد. در اين بررسي ميزان آلودگي گاوهاي سقط كرده اطراف تبريز به نيوسپورا كانينوم با استفاده از اليزاي خانگي 1/17% و در اليزاي تجاري 4/18% محاسبه شد.

Neosporosis is a disease that is caused by Neospora caninum and is recognized by abortion in cow and neuro-muscular paralysis in hind organs in dogs. At the first, this disease was diagnosed in Norway in 1984. Different serological methods such as ELISA are common for diagnosis of disease. The aim of this study was the evaluation of a domestic ELISA for diagnosis of neosporosis in the aborted cows around Tabriz and its comparison with commercial ELISA. In this regard, tachyzoites of Neospora caninum were lysed and coated in the wells using different dilution of coating buffer. Different dilutions of positive control sera were applied in checker board manner for designing of ELISA. The secondary conjugated antibody was diluted as manufacturer’s instruction. The results showed that using 1.5µg antigen per well and the dilution of 1:100 sera can provide the best condition. To calculate the relative sensitivity and specificity of domestic ELISA, a commercial ELISA was performed as a reference test and the cut off value was estimated via ROC curve. The best relative sensitivity and specificity obtained in cut off value of 0.30 OD. In this survey, the rate of infestation in the to Neospora caninum aborted cows in Tabriz were calculated 17.1% and 18.4% by using domestic and commercial ELISA, respectively.