مقايسه اثر وينكريستين بر لنفوسيت‏هاي طبيعي در حال تكثير موش و رده سرطاني BCL1

Comparing the efffect of vincristine on proliferating normal lymphocytes and BCL1 cell line

مقدمه و هدف: تكثير و آپوپتوز جزو لاينفك عملكرد لنفوسيت‌ها در سيستم ايمني است و؛ بسياري از داروهاي شيمي‏درماني ضدسرطان مانند وينكريستين سيكل سلولي را هدف‌گيري‏كرده، القاكننده آپوپتوز در سلول‏هاي سرطاني هستند و به‏عبارتي، سلول‌هايي كه بيشتر تقسيم‏مي‌شوند، مرگ سلولي بيشتري را نيز متحمل مي‏شوند كه ممكن است شامل حال لنفوسيت‌هاي نرمال در حال تكثير و پاسخگو به بدخيمي‌ها نيز بشود؛ لذا هدف اين مطالعه، بررسي مقايسه آثار سايتوتوكسيك داروي ضدسرطاني وينكريستين بر لنفوسيت‌هاي طبيعي در حال استراحت و در حال تكثير در مقايسه با اثر آن بر سلول سرطاني است. مواد و روش‏ها: رده سلولي سرطاني BCL1 كشت‏داده‏شد و سلول‏هاي طبيعي از طحال موش تهيه‏شده، كشت‏داده‏شدند و با استفاده از ميتوژن به تكثير وادار شدند. اثر داروي وينكريستين در غلظت‌هاي مختلف بر اين سلول‏ها لنفوسيت‌هاي نرمال و در حال تكثير طحال موش و مقايسه اثر همين دارو بر رده لنفوم BCL1 در سه زمان بررسي‏شد. درصد سايتوتوكسيسيته دارو توسط تست MTT اندازه‌گيري و IC50 زمانهاي مختلف محاسبه شد. درصد سلول‏هاي آپوپتوتيك به روش رنگ‌آميزي دوگانه اتيديم برمايد و آكريدين اورنج و مشاهده با ميكروسكوپ فلورسانس به‏دست‏آمد. نتايج: نتايج MTT نشان‏داد كه غلظت 5 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر وينكريستين اثر سايتوتوكسيك قابل‏توجهي بر رده سلولي BCL1 دارد و غلظت 2 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر نيز با گذشت زمان اثر سايتوتوكسيك خود ر ا نشان‏مي‌دهد. در لنفوسيت‌هاي نرمال و در حال تكثير، غلظت‌هاي 20 و 10 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر دارو باعث مرگ‏و‏مير سلولي مي‌شوند؛ ولي غلظت‌هاي كمتر از 5 اثر سايتوتوكسيك چنداني بر سلول هاي در حال استراحت ندارند در‏حالي‏كه غلظت هاي كمتر از 5 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر در سلول هاي در حال تكثير بعد از تيمار 72 ساعت اثر سايتوتوكسيك معني‏داري نشان‏دادند. درصد سلول‏هاي آپوپتوتيك متاثر از غلظت‌هاي مختلف دارو مشاهده‏شده با ميكروسكوپ فلورسانس با درصد سايتوتوكسيسيته به‏دست‏آمده همان غلظت‌هاي دارو در تست MTT متناسب بود. نتيجه‌گيري: به‏نظرمي‌رسد بيشترين اثر توكسيك اين دارو بر سلول‏هاي سرطاني است و در سلول‏هاي طبيعي به‏شدت به زمان و فعاليت سلولي، وابسته است.

Background and Objective: Proliferation and apoptosis of lymphocytes are essential parts of the immune system. Most anti-cancer chemotherapy drugs such as vincristine target cell cycle and induce apoptosis in cancer cells. In other words, dividing cells undergo more apoptosis, which may also include the normal proliferating lymphocytes responsive to malignancies as well. Materials and Methods: In this study, the effect of different concentration of vincristine at three different time periods on resting and proliferating spleen lymphocytes were evaluated and compared with the effect of the drug on mouse lymphoma cell line BCL1. The cytotoxicity of vincristine was determined by MTT assay and IC50 was calculated for all periods. The cells were also stained with double staining acridine orange and ethidium bromide and were observed with fluorescence microscope and the percentage of apoptotic cells were determined. Results: MTT results showed that vincristine at concentrations of 10 and 20 ?g/ml caused cell death in both resting and proliferating lymphocytes, but concentrations < 5 ?g/ml did not show any significant cytotoxic effect, while concentrations of 2 and 5 ?g/ml showed significant cytotoxic effect on BCL1 cells. The percentage of the apoptotic cells which were affected by different concentrations of the drug was proportional in the two methods, i.e. fluorescence microscope and MTT assay. Conclusion: Vincristine has a strong cytotoxic effect in tumor cells and its toxic effect in normal cells is highly dependent on time and the activation of the cells.