بررسي تنوع فنوتيپي و ژنوتيپي جدايه‌هاي Agrobacterium از ميزبان‌هاي مختلف در استان‌هاي فارس و كهگيلويه و بويراحمد *

PHENOTYPIC AND GENOTYPIC CHARACTERISTICS OF Agrobacterium ISOLATES FROM DIFFERENT HOSTS IN FARS AND KOHGILUYE AND BOYERAHMAD PROVINCES

در سال‌هاي 1387 و 1388 از باغ‌هاي مو، گلخانه‌هاي پرورش گل رز و هم‌چنين مزارع چغندرقند در استان‌هاي فارس و كهگيلويه و بويراحمد بازديد و از گياهان داراي علايم گال طوقه و ريشه و خاك اطراف آنها نمونه‌برداري و به آزمايشگاه منتقل شد. جداسازي عامل بيماري روي محيط‌هاي NA، DIM agar، 1A و RS انجام گرفت. پس از خالص‌سازي جدايه‌ها، با انجام آزمون‌هاي استاندارد باكتري‌شناسي جدايه‌ها به‌عنوان A. vitis وbiovar 1 A. tumefaciens تشخيص داده شدند. آزمون بيماري‌زايي روي گياهان كالانكويه، گوجه‌فرنگي و آفتابگردان انجام شد و اكثرجدايه‌ها توانستند در اين گياهان توليد گال كنند. براي تشخيص بيماري‌زايي جدايه‌ها نيز از آغازگرهاي اختصاصي A/C´ و VCF/VCR استفاده شد كه به‌ترتيب تمام جدايه‌ها باندهاي 224 و 730 جفت بازي را تكثير كردند. در بررسي آزمون rep-PCR با استفاده از آغازگرهاي BOX و ERIC تنوع زيادي در بين جدايه‌ها مشاهده گرديد. جدايه‌هاي به‌دست آمده از مناطق مختلف استان‌هاي فارس و كهگيلويه و بويراحمد به دو گروه كلي قابل تقسيم بودند. گروه يك نيز به دو زير گروه تقسيم شد، كه يك زير گروه شامل جدايه‌هاي A.vitis (جدا شده از درختان مو) و زير گروه ديگر شامل جدايه‌هاي A. tumefaciens (جدا شده از رز و چغندرقند) بود. گروه دوم نيز تعداد كمي از جدايه‌هاي A. tumefaciens (جدا شده از رز و چغندرقند) را شامل شد. حداكثر شباهت در آزمون rep-PCR در داخل گونه A. vitis با حدود 88 درصد به‌دست آمد. گروه‌بندي براساس خصوصيات ژنوتيپي تا حدودي با گروه‌بندي براساس خصوصيات فنوتيپي مطابقت داشته و آزمون‌هاي فنوتيپي و rep-PCR به خوبي توانستند گونه‌هاي A.vitis و A. tumefaciens را از هم تفكيك نمايند.

From 2008 to 2009 grapevine, rose and sugar beet samples with gall symptoms on crowns and roots were collected from different areas of Fars and Kohgiluye and Boyerahmad provinces. The extracts from galls were cultured on NA, DIM Agar, 1A and RS media. After purification the isolates have been characterized using standard bacteriology tests, the Agrobacterium isolates were identified as A. vitis (from grapevine) and A. tumefaciens (from rose and sugar beet). Pathogenicity tests were done on bryophyllum, tomato and sunflower. Most isolates produced gall on at least one of these plants but some of the isolates did not. The isolates were able to amplify 224 and 730 bp DNA fragments with primers A/C´ and VCF/VCR in PCR test, respectively. The isolates showed high diversity in rep-PCR and the isolates of Fars and Kohgiluye and Boyerahmad were divided into two main groups. Group I was divided into two subgroups which included A. vitis isolates subgroup (isolates from grapevine) and A. tumefaciens isolates subgroup (isolated from other hosts). Group II included a small number of A. tumefaciens isolates. Maximum similarity (88%) was observed in A. vitis species. Clustering based on genotypic characteristics somewhat confirmed clustering based on phenotypic characteristics. The rep-PCR and phenotypic characteristics could differentiate A. vitis and A. tumefaciens species.