ارزيابي سيتوكسيمب نشاندار با لوتسيم 177 براي كاربردهاي درماني

Lutetium 177-Labeled Cetuximab Evaluation for Radioimmunotherapeutic Applications

زمينه و هدف: آنتي بادي منوكلونال سيتوكسيمب به گيرنده فاكتور رشد اپيدرمال متصل مي شود، بنابراين امكان ايجاد روش هاي تشخيصي و درماني از طريق اين گيرنده را فراهم مي آورد. در اين مطالعه قابليت سيتوكسيمب جهت توليد يك راديوداروي جديد مورد بررسي قرار گرفت و تست هاي كنترل كيفي آزمايشگاهي و حيواني به عنوان گام اول در توليد راديوداروي جديد انجام شدند. روش كار: سيتوكسيمب با استفاده از اولترا فيلتر -15 آميكون دياليز و تغليظ گرديد. پس از تخليص، آنتي بادي از طريق شلاتور حلقوي دوكاره، DOTA-NHS، با لوتسيم 177 (Lu177) نشاندار و با استفاده از ستون PD10 تخليص گرديد. خلوص راديوشيميايي و پايداري فراورده در بافر و سرم خون انسان با استفاده از كروماتوگرافي لايه نازك مشخص شدند. ژل الكتروفورز احيايي SDS-PAGE براي تاييد ساختار آنتي بادي نشاندار با ايزوتوپ استفاده شد. مطالعات اوليه توزيع بيولوژيكي در موش هاي نرمال جهت تعيين توزيع كمپلكس راديوايمنوكونژوگه به مدت 72 ساعت انجام شد. يافته ها: خلوص راديوشيميايي كمپلكس 1 ± 98% بود. پايداري در بافر فسفات و در سرم انسان 96 ساعت پس از توليد به ترتيب 2 ± 96% و 4±78% بود. تمامي نمونه ها، كنترل ها و آنتي بادي نشاندار، در ژل الكتروفورز الگوي حركتي مشابه نشان دادند. توزيع بيولوژيكي سيتوكسيمب-DOTA- Lu177 در موش نرمال بررسي شد و بالاترين درصد راديواكتيويته دوز تزريق شده در هر گرم بافت (%ID/g) در خون (3/1±13% در 24 ساعت) و كبد (3/1±1/9% در 24 ساعت) مشاهده گرديد. نتيجه گيري: نتايج ما نشان مي دهد كه DOTA – سيتوكسيمب مي تواند ضمن حفظ ساختار خود، در پايداري قابل قبول با Lu177 نشان دار شود. كمپلكس جديد مي تواند براي ارزيابي بيشتر در حيوانات و احتمالا به عنوان راديوداروي جديد جهت راديوايمنوتراپي سرطان ها در انسان در نظر گرفته شود.

Background & Objectives: The monoclonal antibody cetuximab binds to EGFR and thus provides an opportunity to create both imaging and therapeutic modalities that target this receptor. The potential of cetuximab as a radioimmunoconjugate was investigated and quality control tests (in vitro and in vivo) were performed as a first step in the production of a new radiopharmaceutical. Methods: Cetuximab solution was dialyzed and concentrated using an Amicon Ultra-15 filter. Purified antibody was labeled with lutetium-177 using the acyclic bifunctional chelator, DOTA-NHS, and radioimmunoconjugates were purified by PD10 columns. Radiochemical purity and stability in buffer and human blood serum were determined using thin layer chromatography. Integrity of the radiolabeled complex was checked by SDS-PAGE. Preliminary biodistribution studies in normal mice model performed to determine radioimmunoconjugates distribution up to 72h. Results: The radiochemical purity of the complex was 98±1%. The stabilities in phosphate buffer and in human blood serum at 96 hours post-preparation were 96±2 % and 78±4%, respectively. All of the samples, controls and radiolabeled antibodies, showed a similar pattern of migration in the gel electrophoresis. Biodistribution of Lu177-cetuximab was evaluated in normal mice and the highest ID/g% was observed in the blood (13.2±1.3% at 24 hours) and the liver (9.1±1.3% at 24 hours). Conclusion: Our results show that DOTA-cituximab can be labeled with 177Lu. Lu177-cetuximab has sufficient stability and retains its integrity. The new complex could be considered for further evaluation in animals and possibly in humans as a new radiopharmaceutical for use in radioimmunotherapy of cancers.