تاثير غلظت هاي مختلف هيپوكلريت سديم بر رها شدن و عدم رها شدن اسپوروزوييت هاي Cryptosporidium baileyi در آزمايشگاه

Efficacy of different concentrations of sodium hypochlorite on the in vitro excystation of sporozoites of Cryptosporidium baileyi

از هيپو كلريت سديم به منظور ضد عفوني نمودن انگل كريپتوسپوريديوم در برخي از محيط هاي آلوده به اين انگل و همين طور در كارهاي تحقيقاتي به منظور پاك سازي و خالص نمودن آن از باكتري ها و آماده نمودن آن براي آزاد سازي اسپوروزوييت ها، استفاده شده است. هدف از اجراي اين مطالعه تعيين تاثير آزمايشگاهي ماده ضدعفوني كننده هيپو كلريت سديم بر روي مرحله حياتي رها شدن اسپوروزوييت هاي انگل كريپتوسپوريديوم بيله اي بود. بدين منظور هيپوكلريت تجاري معادل هيپوكلريت سديم 5 درصد و در غلظت ها و دماهاي مختلف به كار رفت. اووسيست هاي كريپتوسپوريديوم بيله اي از بورس فابريسيو س جوجه هاي گوشتي 30 روزه يك مرغداري در اطراف شيراز جدا سازي و شناسايي گرديد. اووسيست هاي مذكور در جوجه هاي حساس دو روزه تكثير و با روش تعديل يافته محلول شكر شيتر خالص گرديد. اووسيست ها با غلظت هاي مختلف هيپوكلريت سديم 5 در صد در دما و زمانهاي متفاوت مجاور گرديد. پس از شستشو، اووسيست ها در معرض مايع آزاد كننده اسپوروزييت مناسب قرار گرفتند و آزاد سازي و تحرك اسپوروزوييت ها با كمك ميكروسكوپ نوري مورد مشاهده قرار گرفت. تاثير كامل در ممانعت از رها سازي اسپوروزوييت ها در غفلظت 5 و5/2 در صد و در دماي 37 درجه سانتي گراد به مدت 15 دقيقه مشاهده گرديد. و عدم تاثير كامل در غلظت 25/1 در صد و دماي 4 درجه سانتي گراد مشاهده شد. در ساير موارد هم درجاتي از ممانعت از آزاد سازي اسپوروزوييت ها ديده شد. با توجه به نتايج، مي توان از غلظت 25 درصد هيپوكلريت تجاري معادل 1 درصد هيپوكلريت سديم در دماي 4 درجه و مدت 15-10 دقيقه به منظور خالص سازي و استريل نمودن اووسيست ها و افزايش درصد باز شدن اووسيست ها در روش هاي رهاسازي اسپوروزوييت در آزمايشگاه استفاده نمود.

Sodium hypochlorite has been used for disinfecting of Cryptosporidium in some contaminated environments by this parasite and also in laboratory works it has been used for the purification of the parasite from bacteria and as a treatment for facilitating of releasing the sporozoites of Cryptosporidium (excystation). The excystation is a critical stage of life cycle of the parasite. The purpose of this study was to determine the efficacy of sodium hypochlorite on the laboratory excystation of sporozoites of Cryptosporidium baileyi. C. baileyi oocysts have been isolated and identified from the bursa of fabricus of naturally infected 30- day- old broiler chickens in Shiraz area. The oocysts were propagated in sensitive 2-day-old chicks and purified by modified sheater’s sugar flotation method. Oocysts were exposed to various concentrations of bleach and incubated at various temperatures for 15 min prior to being washed by centrifuging. Then the oocysts were exposed to the appropriate excystation fluid and releasing the sporozoites were observed by light microscopy. Complete excystation inhibition was seen by 2.5% and 5% Sodium hypochlorite at 37 ? C for 15 min. Treatment of oocysts with 1.25% Sodium hypochlorite at 4 ? C had no effect on laboratory excystation. In other cases there were some degree of excystation inhibition. The results indicate that 25% commercial bleach or 1.25% Sodium hypochlorite at 4 ? C for 10-15 min may be suitable for purification and sterilization of oocysts and also this treatment facilitates and enhances in vitro sporozoite releasing from the oocysts.