شناسايي سويه Toxoplasma gondii در انسان و موش در شهرستان اروميه به روشPCR-RFLP

Identification of Toxoplasma gondii strain in human and mouse in Urmia by PCR-RFLP

T.gondii يك كوكسيدياي روده اي است و آلودگي به آن در انسان و حيوانات خونگرم در سراسر دنيا وجود دارد.اين تك ياخته مي تواند سبب واگيري شديد و تلفات در جنين در حال رشد، موارد نقص سيستم ايمني مانند مبتلايان به ايدز و افرادي مبتلا به سرطان كه تحت شيمي درماني قرار دارند، شود. هم چنين موجب سقط جنين در گوسفند و بز و ايجاد خسارات اقتصادي مهم مي گردد. در اين بررسي از روش واكنش زنجيره اي پلي مراز(PCR)به منظور تشخيص آلودگي به T.gondii با استفاده از ژن 1 B استفاده گرديد.اين ژن در هر سه سويه توكسوپلاسما كه تا به حال مشخص شده اند، وجود دارد.نمونه هاي خون در اين بررسي از 26 نفر از افراد مشكوك به توكسو پلاسما از آزمايشگاه هاي انساني و نمونه هاي بافت از قلب و مغز 54 قطعه موش خانگي در شهرستان اروميه اخذ گرديد. در اين بررسي براي استخراج DNA از روش Fuentes و همكاران1996 براي نمونه هاي خون انسان و از روش Sambrook و همكاران 1989 براي نمونه هاي بافت مغز و قلب موش استفاده شد.بعد از رديابي محصولات PCR مشخص گرديد كه 19 نمونه آلوده به توكسوپلاسما گونديي در بين نمونه هاي اخذ شده وجود دارد (7 نمونه انسان و 12 نمونه موش).نمونه هاي مثبت تحت هضم آنزيمي با آنزيم محدودكننده AluI قرار گرفتند كه الگوي برش بعد از هضم آنزيمي محصول PCR كاملاً مشابه بود كه مربوط به تيپT.gondii I مي باشد. اين نتايج نشان مي دهد كه سويه مشابه از T.gondii مي توانند باعث آلودگي در انسان و موش گردد.

Infection by Toxoplasma gondii is widespread inhumans and many other species of warm-blooded animals. It can cause significant morbidity and mortality in the developing fetus and in immunocompromised individuals, including humans with Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) or submitted to cancer chemotherapy. Among livestock, sheep and goat are more widely infected with T. gondii. This parasite is a major cause of abortion, with significant economic losses to sheep and goat breeders. We applied the polymerase chain reaction (PCR) for detection of the pathogenic protozoan T. gondii based on its B? gene. The B? gene is present and conserved in all six T. gondii strains identified to date. For this purpose 26 suspected human’s blood samples and 54 mice brain and heart were collected from Urmia. In this study, PCR was performed using the previously described primers (Homanet al 2000), which were designed to detect the B? gene of T. gondii. The targeted B? gene is highly conserved in all T. gondii strains and is multiple copy genes within the T. gondii genome. The method used for the characterization of T. gondii strains implied digestion with AluIrestriction enzyme of the fragments amplified. The results indicated 19 positive samples (7 human and 12 mouse samples). The 529bp fragment was generated in all positive samples tested and one RFLP patterns were obtained. The results indicated that the same strain of T. gondii can infect human and mouse in surveyed region.