عنوان مقاله :
كلونينگ و بيان موقت ژن محافظت‌كننده سلولي، HO-1 ، در سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال از طريق سيستم بياني آدنوويروس بر مبناي تكنولوژي Gateway
عنوان فرعي :
Cloning and transient expression of cytoprotective factor, HO-1, in mesenchymal stem cells using the adenoviral expression system through Gateway technology
پديد آورندگان :
حامدي اصل، پژمان نويسنده كارشناس ارشد خون‌شناسي ـ مركز تحقيقات انتقال خون ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ـ تهران ـ ايران Hamedi Asl, .P , حلبيان، راحله نويسنده , , محمدزاده ، محمد نويسنده , , محمدي‌پور، مهشيد نويسنده PhD ژنتيك مولكولي ـ مركز تحقيقات سازمان انتقال خون ايران ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ـ تهران ـ ايران Mohammadipoor, .M , بخشنده، زهرا نويسنده كارشناس ارشد خون شناسي، مركز تحقيقات انتقال خون، موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون، تهران، ايران Bakhshandeh, .Z , حامدي اصل، داريوش نويسنده كارشناس ارشد ميكروب‌شناسي باليني ـ انستيتو تحقيقاتي سرم و اكسن‌سازي رازي كرج ـ ايران Hamedi Asl, .D , كياني، علي‌اصغر نويسنده PhD هماتولوژي و بانك خون ـ مرب دانشگاه علوم پزشكي لرستان ـ خرم‌آباد ـ ايران Kiani, .A.A , جليلي، محمدعلي نويسنده , , اميري‌زاده، ناصر نويسنده PhD هماتولوژي و بانك خون ـ استاديار مركز تحقيقات انتقال خون ـ موسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون ايران ـ صندوق پستي: 1157-14665 Amirizadeh, .N , حبيبي رودكنار، مهريار نويسنده ,
اطلاعات موجودي :
فصلنامه سال 1391 شماره 36
كليدواژه :
Adenoviruses , genetic engineering , Heme oxygenase-1 , mesenchymal stem cells , هم‌اكسيژناز - 1 , مهندسي ژنتيك , آدنوويروس‌ها , سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال
چكيده فارسي :
چكيده
سابقه و هدف
HO-1 (هِم‌اكسيژناز-1) يكي از عوامل قدرتمند محافظت كننده سلولي مي‌باشد. هدف از اين مطالعه، كلونينگ و بيان موقت ژن HO-1 انساني در سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال(MSCها) با استفاده از سيستم بياني آدنوويروسي برمبناي تكنولوژي Gateway بود.
مواد و روش‌ها
در يك مطالعه تجربي، به منظور القاي HO-1 ، رده سلولي 549A به مدت 1 ساعت با اشعه UV مواجه گرديد. cDNA توتال HO-1 جداسازي شد و از طريق واكنش كلونينگ TOPO به وكتور pENTR TOPO/D كلون گرديد. براي ايجاد كلون بياني، واكنش نوتركيبي LR بين كلون اوليه و وكتور مقصد(pAd/CMV/V5-DEST) به انجام رسيد. ويروس نوتركيب در رده سلولي يوكاريوتي مناسب تشكيل شد. MSCها به وسيله ويروس نوتركيب بيان‌كننده HO-1 آلوده‌سازي شدند.
يافته‌ها
نتايج نشان داد كه HO-1 انساني نوتركيب با موفقيت كلون شده و صحت و قرار گرفتن ژن در قالب صحيح درون وكتور به وسيله تعيين توالي DNA تاييد شد. بيان HO-1 در MSCها به وسيله آناليز RT-PCR و وسترن بلات تاييد گرديد. اين نتايج حاكي از اين بود كه بيان HO-1 موقت است.
نتيجه گيري
بيان موقت ژن HO-1 انساني در MSCها با استفاده از سيستم بياني آدنوويروسي، ممكن است يك استراتژي انتقال ژني كارآمد در راستاي ارتقاي سلول درماني فراهم نمايد.
چكيده لاتين :
Abstract
Background and Objectives
Heme oxegenase1 (HO-1) is one of the potent cytoprotective factors. The goal of this study was to perform cloning and transient over expression of the human HO-1 gene in mesenchymal stem cells (MSCs) using the adenoviral expression system based on the gateway technology.
Materials and Methods
In order to induce expression of HO-1, A549 cell lines were exposed to UV for 1 hour. The full length cDNA of HO-1 was isolated and cloned into pENTR TOPO/D vector by TOPO cloning reaction. To construct the expression clone, a LR recombination reaction was carried out between the entry clone and destination vector, pAd/CMV/V5-DEST. The recombinant virus was produced in the appropriate mammalian cell line. MSCs were infected by the recombinant virus expressing HO-1.
Results
The results showed that human recombinant HO-1 was successfully cloned and the accuracy of the gene and its frame in the vector were confirmed by DNA sequencing. Expression of HO-1 in MSCs was confirmed by RT-PCR and western blot analysis. The results indicated that the expression of HO-1 is transient.
Conclusions
Transient expression of human HO-1 gene in MSCs by using adenovirus expression system may be considered as an efficient gene transfer strategy into MSCs in order to promote stem cell therapy.
اطلاعات موجودي :
فصلنامه با شماره پیاپی 36 سال 1391
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
