بررسي ترشح Transforming Growth Factor-beta2 از سلول‌هاي سرطاني تخمدان تيمارشده با عصاره‌هاي آبي و الكلي و اسانس گياه دارويي زنيان

Transforming Growth Factor-beta2 Levels in Human Ovarian Cancer Cell Cultures Treated with Aques and Alcoholic, and Essential Oil of Trachyspermum copticum (L.) Link (Zenian)

سابقه و هدف: طبق نتيجه يكي از مطالعات انجام‌شده در كشور، عصاره‌هاي آبي و الكلي بذر گياه Trachyspermum copticum (L.) Link (زنيان) كه بومي ايران، مصر، افغانستان و هندوستان مي‌باشد، بر سلول‌هاي سرطان تخمدان انساني، اثرات سايتوتوكسيك دارند. هدف اين مطالعه، بررسي اثرات غلظتهاي غيركشنده عصاره‌هاي آبي و الكلي، و اسانس بذر گياه فوق بر ترشح فاكتور دگرگوني رشد- بتا- دو (transforming growth factor-beta2) از سلول‌هاي سرطان تخمدان انساني A2780 نوع حساس و مقاوم به درمان با داروي سيس‌پلاتين بود. روش بررسي: دو نوع سلول سرطان تخمدان انساني (A2780) حساس و مقاوم به درمان با داروي سيس‌پلاتين، تحت تاثير غلظتهاي مختلف از عصاره‌هاي آبي و الكلي بذر گياه زنيان (از 50 الي 7000 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر)، قرار داده شدند؛ سپس با استفاده از روش MTT و محاسبه درصد كشندگي عصاره‌ها، تنها غلظتهايي از عصاره‌ها انتخاب شدند كه طي 24 ساعت انكوباسيون، فاقد اثر سايتوتوكسيك بر سلول‌ها بودند. براي مجاورت عصاره آبي با سلول‌هاي حساس، غلظتهاي 50، 100، 200 و 1000 و براي مجاورت با سلول‌هاي مقاوم، غلظتهاي 50، 100، 200 و 2000 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر انتخاب شدند. براي مجاورت عصاره الكلي با سلول‌هاي حساس و مقاوم، غلظتهاي 50، 100 و 200 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر انتخاب شدند. به علت سايتوتوكسيك ‌بودن اسانس حتي با غلظتهاي بسيار اندك، اين ماده از مطالعه حذف شد. سوپرناتانت محيطهاي كشت با تكنيك الايزا از نظر غلظت TGF-beta2 مورد سنجش قرار گرفت. نتايج، با تست آزمون مقايسه ميانگين‌ها آناليز شدند. مقدار p كمتر از 05/0 معني‌دار تلقي شد. يافته‌ها: تيمار سلول‌هاي حساس، با غلظت 200 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر و همچنين تيمار سلول‌هاي مقاوم با غلظتهاي 50 و 2000 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر از عصاره آبي با غلظتهاي TGF-beta2 بسيار كمتري در سوپرناتانت نسبت به ساير غلظتها همراه بود (001/0p < ). ولي در اثر تيمار سلول‌ها با غلظتهاي مختلفي از عصاره الكلي، اختلاف معني‌داري در غلظت TGF-beta2 در بين سوپرناتانت‌ها ملاحظه نشد. نتيجه‌گيري: تيمار سلول‌هاي سرطان تخمدان انساني (A2780، از نوع حساس و مقاوم به سيس‌پلاتين) با غلظتهاي خاصي از عصاره آبي، با غلظت‌هاي بمراتب كمتري از TGF-beta2‌ در سوپرناتانت محيط كشت همراه بود. با توجه به نقش مهم TGF-beta2 در رشد و متاستاز سلول‌هاي سرطاني، مطالعات تكميلي بررسي‌كننده تركيب شيميايي عصاره آبي و سازوكار كمتربودن سطح TGF-beta2 در سوپرناتانت، به روشن‌شدن نوع ارتباط عصاره آبي بذر گياه زنيان با TGF-beta2 و اثرات احتمالي آن در كنترل رشد و متاستاز سلول‌هاي سرطاني تخمدان كمك خواهند كرد.

Background and Aim: Trachyspermum copticum (L.) Link (called Zenian in Persian) is a native plant to Iran, Egypt, Afghanestan and India and itʹs aqueous and alcoholic extracts exert cytotoxic effects on human ovarian cancer cell cultures. Our aim was to study the Transforming Growth Factor-beta2 (TGF-beta2) levels in supernatant of human ovarian cell [A2780, sensitive and resistant to Cisplatin] cultures treated with aqueous and alcoholic, and essential oil of dried seeds of Trachyspermum copticum (L.) Link. Materials and Methods: Human ovarian cancer cells (S and CP) treated with different concentrations (from 50 to 7000 µg/mL) of aqueous and alcoholic extracts. Using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide test (MTT) and calculating cytotoxic percentage of each extracts after overnight incubation, non cytotoxic concentrations of extracts were selected. Non cytotoxic concentrations of aqueous extract for treatment of sensitive cells were 50, 100, 200, and 1000 µg/mL; and for resistant cells were 50, 100, 200, and 2000 µg/mL. Non cytotoxic concentrations of alcoholic extract for treatment of sensitive and resistant cells were 50, 100, and 200 µg/mL. Essential oil excluded from the study because of its extremely cytotoxic effects on cells even with very low concentrations. TGF-beta2 concentrations in supernatants were measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results were analyzed with comparing mean test. P value less than 0.05 was considered statistically meaningful. Results: Treatment of sensitive cells with 200 µg/mL, and resistant cells with 50 and 2000 µg/mL of aqueous extract associated with very less concentrations of TGF-beta in supernatants comparing with other extract concentrations (p < 0.001). But there was no meaningful association between the treatment of cells with alcoholic extract and TGF-beta2 concentrations in supernatants. Conclusion: Treatment of human ovarian cancer cells (A2780, sensitive and resistant to Cisplatin) with some concentrations of aqueous extract associated with diminished levels of TGF-beta2 in supernatants comparing other concentrations. Considering critical role of TGF-beta2 in growth and metastasis of tumor cells, further studies for determining the chemical components of aqueous extract and mechanism(s) of its effects on TGF-beta2 levels should be done.