مقايسه روش هاي اندازه گيري ميكروسكوپي و مولكولي اُاُسيست ها در تمايز آيمريا نكاتريكس و ايمريا تنلا در مدفوع مرغان بومي

Comparison of microscopical measurment and PCR methods of oocyte for differentiation of Eimeria tenella and Eimeria necatrix in feces of back yard hens

عامل بيماري كوكسيديوزانگل تك‌ياخته‌اي از جنس آيمريا است كه در مجراي روده تكثير و موجب آسيب رساندن به بافت روده مي‌شود كه نتيجه‌ي آن اختلال در تغذيه، مراحل هضم و جذب مواد غذايي، از دست دادن آب بدن، خون‌ريزي و افزايش حساسيت به ساير عوامل بيماري‌زا مي‌باشد. بررسي منابع نشان مي‌دهد در خصوص شناسايي گونه‌هاي آيمريانكاتريكس و آيمريا تنلا به روش اندازه¬گيري ميكروسكپي و PCR مطالعه‌اي انجام نشده است. هدف از اين مطالعه شناسايي آيمريانكاتريكس و آيمر تنلا در مدفوع مرغ¬هاي بومي از راه شناسايي ژن ITS-1 با استفاده از روش¬هاي اندازه¬گيري ميكروسكوپي و مولكولي اُاُسيست¬ها مي¬باشد. به اين منظور 50 نمونه مدفوع از مرغ‌هاي بومي مشكوك به بيماري كوكسيديوز به طور تصادفي جمع‌آوري شدند. از هر كدام از مرغان 2 نمونه يكي جهت روش متداول اندازه‌گيري اُاُسيست و ديگري جهت PCR گرفته شد. نمونه‌ها بلافاصله به آزمايشگاه انگل‌شناسي دانشكده دامپزشكي اهواز منتقل شدند و به 2 روش متداول اندازه‌گيري اُاُسيست‌ها (ميكروسكپي) و روش PCR مورد آزمايش قرار گرفتند. اُاُسيست‌هاي هر نمونه مدفوع با استفاده از محلول شناور كننده جدا شدند و به كمك ميكروسكپ نوري و با استفاده از شكل و اندازه اُاُسيست، اندازه‌گيري شدند. در روش PCR اُاُسيست‌هاي موجود در هر 50 نمونه مدفوع به روش شناورسازي و خالص‌سازي جدا و شستشو داده شدند. پس از استخراج DNA، آزمايش PCR انجام گرفت. نتايج حاصل از اين بررسي نشان داد ميزان آلودگي در آزمايش ميكروسكپي و PCR براي آيمريا تنلا به ترتيب 34 و 48 درصد مي‌باشد و براي آيمريا نكاتريكس در آزمايش ميكروسكپي و PCR به ترتيب 10 و 6 درصد است. نتايج نهايي بيانگر اين است كه روش PCR روش مطمئن و مناسب‌تري نسبت به روش اندازه¬گيري انواع آيمرياها مي‌باشد، ميزان آلودگي مرغ‌هاي بومي نسبت به آيمريا تنلا بيشتر از آيمريا نكاتريكس است، آلودگي مرغ‌هاي بومي به آيمريا تنلا و آيمريا نكاتريكس بسيار بالا (57%) مي‌باشد، مرغ‌هاي بومي احتمالاً نقش مهمي در اپيدميولوژي و انتشار آلودگي كوكسيديوز در مزارع مرغ‌هاي صنعتي دارند. ضريب هم‌بستگي دو آزمايش PCR و روش متداول اندازه¬گيري براي آيمريا تنلا 24/0 و آيمريا نكاتريكس 47/0 است.

The cause of coccidiosis is a protozoan parasite belongs to genus of Eimeria which multiply in the intestinal tract. The parasites damage the internal tissues and caused interruption of feeding and digestion processes, malfunction of nutrient absorption, dehydration, intestinal bleeding and increase susceptibility to other disease agents. Review of literatures indicates that no study has been done on the identification Eimeria nacatrix and Eimeria tenella by oocyst measurement and PCR methods. The aim of this study was the identification of Eimeria tenella and Eimeria necatrix in feces of the backyard hens by amplification of ITS-1 gene using PCR and also, identification of species by oocyst measurement methods. Fifty feces samples from suspected backyard hen have been collected randomly. Two samples from each hen has been taken. One sample for routine oocyst measurement and the other sample for ‍‍PCR method. Samples, were quickly transmitted to parasitology laboratory in the Faculty of Veterinary Medicine of Ahvaz and oocysts separated by floating method. By using optical microscope, the shape and size of oocysts were identified. The results of this study indicated that the contamination rate for E. tenella in PCR and measurement test was 48% and 34%, respectively and for E. necatrix was 6% in PCR and10% in oocyst measurement test. Both species of Eimeria can produce acute coccidiosis in backyard hens and these can be regarded as a potential source of contamination in poultry farm industry. It was concluded that PCR is better method compare to routine oocyct measurement test for identification of Eimeria species. The rate of Eimeria tenella infection was higher than Eimeria necatrix. Therefore, the backyard hens may play important roles in epidemiology and spread contamination of E. necatrix and E. tenella in poultry farm industry. Rate of correlation between two methods for E. tenella and E.necatrix were 0.24 and 0.47, respectively.