تشخيص و رديابي مايكوپلاسما سينوويه از مرغداري‌هاي صنعتي با استفاده از روش واكنش زنجيره‌اي پليمراز بر اساس ژن vlhA

Diagnosis and detection of Mycoplasma Synoviae from commercial poultry flocks using polymeras chain reaction (PCR) based on amplification of vlhA gene

مايكوپلاسما سينوويه مهمترين عامل بيماريزا در ماكيان است و همه ساله خسارات اقتصادي قابل توجهي را متوجه صنعت طيور در ايران مي سازد. مايكوپلاسما سينوويه قادر به بيان ليپوپروتيين هماگلوتينين متغير(VlhA) Variable lipoprotein hemagglutinin A مي باشد كه نقش مهمي در ايجاد بيماري ايفا مي كند. هدف اصلي اين مطالعه تشخيص و شناسايي جدايه هاي مايكوپلاسما سينوويه بر اساس ژن vlhA بود. از گله هاي طيور صنعتي سه استان (تهران، مركزي و قزوين) كه داراي علايم مشكوك به آلودگي بودند، توسط سوآپ هاي كتاني و از شكاف حلقي كامي، ناي و كيسه‌هاي هوايي نسبت به نمونه گيري اقدام شد. در اين مطالعه ضمن جداسازي و شناسايي مايكوپلاسما با استفاده از روش كشت و آزمون PCR جنس مايكوپلاسما، نسبت به آزمون PCR براي ناحيه محافظت شده ژن vlhA مايكوپلاسما سينوويه نيز مبادرت گرديد و بدين ترتيب علاوه بر پرايمرهاي اختصاصي جنس مايكوپلاسما از جفت پرايمر مربوط به ناحيه محافظت شده انتهاي آميني ژن vlhA استفاده گرديد. در نتايج مشاهده شد كه محصول PCR توليدي براي پرايمرهاي اختصاصي ژن vlhA در نمونه هاي مثبت مايكوپلاسما سينوويه، 350-400 جفت بازي براي هر جدايه بر روي ژل الكتروفورز تشكيل داده شد و از بين 43 نمونه مورد مطالعه، در روش كشت، 28(65%) نمونه مثبت مشاهده گرديد و در آزمون PCR جنس مايكوپلاسما، 33(76%) نمونه و همچنين 24(55%) نمونه در آزمون PCR ژن vlhA مايكوپلاسما سينوويه، مثبت گزارش شدند. نتايج اين مطالعه نشان مي دهد كه آزمون PCR در ناحيه?5 ژن vlhA مايكوپلاسما سينوويه جهت شناسايي جدايه‌ها كاربردي بوده و همچنين به علت دربرداشتن نواحي RI، RII و ناحيه پلي مورفيسم RIII، با كارايي و حساسيت بالا، مي تواند جهت تشخيص و رديابي گونه مايكوپلاسما سينوويه مورد استفاده قرار گيرد.

Mycoplasma Synoviae is a major avian pathogen and cases many economic losses on poultry industry in Iran, Mycoplasma Synoviae synthesizes Variable lipoprotein heamagglutinin(VlhA), is believed to play a major in pathogenesis of the disease. The objective of the present study was to diagnosis and detection of Mycoplasma Synoviae isolates based on the vlhA gene.This study was designed to detect MS through culture isolation and polymerase chain reaction (PCR) assay to demonstrated the involvement of MS infection in trachea and the lung/air sac samples taken from commercial poultry flocks of provinces: Tehran, Qazvin and Markazi with clinical signs of the disease. Moreover the specific primers to the Mycoplasma genuse from the primes complementary to the single-copy conserved 5´ end of vlhA gene were used for detection of MS by vlhA-PCR. PCR results, in addition to identification of Mycoplasma specie, revealed variable sizes of 350-400bp for each isolates. Of the 43 swabs 28(65%) yielded one of the potentially pathogenic Mycoplasmas evaluated for using PPLO agar culture diagnostic method, and 33(76%) yielded one of the potentially pathogenic Mycoplasmas evaluated for Mycoplasma genuse PCR as diagnostic metod and 24(55%) swabs yielded Mycoplasma Synoviae for using vlhA PCR as diagnostic metod. The results of this study demonstrated that PCR based on amplification of conserved 5? end of vlhA gene is an efficient tool for detection of Mycoplasma Synoviae isolates, as well as due to contain of RI, RII and RIII regions its can with top sensitive and operative, be used for to diagnosis and detection of Mycoplasma Synoviae isolates.