باززايي و تراريختي در برگ و بافت جنين‌زاي هاپلوييد حاصل از كشت تخمك چغندرقند

(.Regeneration and Transformation of Haploid Leaf and Embryogenic Tissues Derived from Ovule Culture in Sugar Beet (Beta vulgaris L

به منظور استفاده از بافت هاپلوييدي گياه چغندرقند براي توليد گياهان تراريخته خالص از نظر ژن انتقالي، ابتدا يك سري آزمايش براي تكثير و جوانه‌زايي جنين‌هاي هاپلوييد حاصل از كشت تخمك انجام گرفت. بدين‌ترتيب مشخص گرديد كه محيط كشت پايه MSB يا PGoB به همراه 3 درصد ساكارز با تركيب هورموني 2/0 ميلي‌گرم در ليتر بنزيل آدنين (BA) و 5/0 ميلي‌گرم در ليتر نفتالن استيك اسيد (NAA) مي‌تواند براي تكثير جنين‌هاي هاپلوييد و محيط كشت پايه MSB نصف غلظت به همراه يك درصد ساكارز براي تكامل جنين‌ها و توليد جوانه به كار رود. همچنين براي توليد جوانه رويشي از برگ هاپلوييد از محيط كشت PGoB حاوي يك ميلي‌گرم در ليتر BA و يكي ميلي‌گرم در ليتر NAA استفاده گرديد. پس از انجام آزمون‌هاي فوق از كالوس‌هاي جنين‌زا و نيز برگ جوانه‌هاي حاصل از جنين‌ هاپلوييد براي تراريختي با آگروباكتريوم تومه‌فاسينس حامل ناقل دوگانه pBI121 استفاده گرديد. بافت‌هاي تلقيح‌شده پس از دو روز نگه داري در كشت توام به محيط گزينش‌ حاوي 50 ميلي گرم در ليتر كانامايسين منتقل شدند. پس از 5-3 هفته جوانه‌هاي حاصل از هر دو نوع جداكشت با سنجش Gus مورد ارزيابي قرار گرفتند. نتايج نشان داد كه برگ و جنين هاپلوييد هر دو قابليت زيادي در توليد جوانه‌هاي تراريخته دارا مي‌باشند.

In order to use of haploid tissue of sugar beet for producing transgenic plants, at first, some experiments were accomplished for shoot production of haploid leaves from haploid embryos. Results of current study indicated that MSB or PGoB medium supplemented with 3% sucrose, 0.2 mgl-1 BA and 0.5 mgl-1 NAA could be used for increasing haploid embryos and half strength MSB medium contains 1% sucrose to develop embryos and shoot production. Moreover, PGoB medium supplemented with 1 mgl-1 BA and 1 mgl-1 NAA was used for shoot production from haploid leaves. In the next step, haploid embryogenic calli and leaves were inoculated with Agrobacterium tumefaciens cells harboring pBI121 binary vector. After 2 days co-culture, the inoculated explants were transferred to selection medium contains 50 mgl-1 kanamycin. After 3-5 weeks, putative transgenic shoots were analyzed by GUS staining. Results showed that two explants have ability for shoot regeneration of haploid transgenic cells.