جداسازي و شناسايي سلول‏هاي بنيادي از منبع ژله وارتون بند ناف انسان

Isolation and Characterization of Human Umbilical Cord Wharton’s jelly Stem Cells

زمينه و هدف: سلول هاي بنيادي به عنوان پشتيبان اساسي بافت هاي بدن موجودات پرسلولي مي باشند. اين سلول ها باعث مي شوند خون، استخوان، گامت ها، بافت اپي تليال، سيستم عصبي، ماهيچه و ساير بافت هاي بدن بوسيله سلول‏هاي جديد در طول دوره زندگي جايگزين شوند. سلول هاي مزانشيمي ژله وارتون بند ناف، در سال هاي اخير مورد توجه بسياري از محققين قرار گرفته است. سلول هاي بنيادي مزانشيمي ژله وارتون نشانگرهاي سطحي سلول هاي بنيادي مزانشيمي را بيان مي كنند. در اين مطالعه، سلول هاي بنيادي ژله وارتون بند ناف انسان با استفاده از روش كشت قطعه بافت جداسازي گرديد. براي نشان دادن خاصيت بنيادينگي اين سلول ها سه نشانگر CD شامل CD105 ، CD44 و CD34 مورد آزمايش قرار گرفت. هدف از اين مطالعه بررسي ويژگي هاي مورفولوژيكي اين سلول ها و نشانگرهاي سطحي آنها بود. روش كار: بند ناف نوزاد تازه متولد شده به روش سزارين، از بيمارستان آرتا اردبيل تهيه گرديد و در شرايط كاملا استريل به آزمايشگاه انتقال داده شد و به روش كشت قطعه بافت، در محيط كشت DMEMكشت داده شد. بعد از جدا شدن سلول ها و رسيدن به فاز لگاريتمي، سلول ها پاساژ داده شدند. سپس ويژگي هاي رشد آنها بررسي شده و با استفاده از روش RT-PCR نشانگرهاي سطحي CD44 و CD105 و CD34 بررسي گرديد. يافته ها‏: سلول هاي بنيادي ژله وارتون بند ناف بعد از 7 روز شروع به جدا شدن از قطعه هاي بافتي كردند. در بررسي هاي مورفولوژيكي دو نوع تيپ 1 و تيپ 2 مشاهده گرديد. بررسي هاي تكنيك RT-PCR نيز نشان دهنده بيان دو نشانگر CD44 و CD105 و عدم بيان نشانگر CD34 بود. نتيجه گيري: بند ناف انسان مي‏تواند يك منبع جايگزين براي سلول هاي بنيادي مغز استخوان در جهت سلول درماني و مهندسي بافت گردد. اين سلول ها ظاهر فيبروبلاستي دارند. اين سلول ها بعد از گذراندن فاز lag و ورود به فاز log به راحتي در محيط كشت رشد مي كنند و ويژگي هاي بنيادي خود را تا پاساژ هاي بالاتر حفظ مي كنند.

Background & Objectives: Stem cells are fundamental supporter of multicellular tissue. They allow blood, bone, gametes, epithelia, nervous system, muscle, and other tissues to be replaced by fresh cells throughout life. In recent years human Wharton’s jelly stem cells (WJSCs) have gained attention. They express a number of surface markers characteristic of mesenchymal stem cells. In this study, human Wharton’s jelly stem cells were isolated using explant method. To show the stemness property of these cells, three CD markers including CD105, CD44 and CD34 were tested. Methods: The umbilical cord samples were collected by Caesarian section at Arta Hospital in Ardabil. Cords were transferred in sterile conditions and stem cells were isolated using explant method. After log phase, cells were passaged then growth characteristics and CD105, CD44 and CD34 markers investigated by RT-PCR. Results: Separation of human Wharton’s jelly stem cells were started after 7 days. WJSCs in culture revealed two distinct cell population named Type 1 and Type 2. RT-PCR results showed that WJSCs were CD105+, CD44+ and CD34-. Conclusion: Human umbilical cord stem cells could be an alternative source instead bone marrow stem cells for cell therapy and tissue engineering. These cells have a fibroblastic appearance. Following the lag phase and into log phase respectively, cells grow easily in culture and retain stemness properties in higher passages. Key