جداسازي و شناسايي گالاكتو مانان پروتيين از Aspergillus fumigatus AF-293

Isolation and identification of galactomannoprotein Aspergillus fumigatus AF-293

خانواده Aspergillus جز قارچ هاي فرصت طلب مي باشند كه سبب سندرم هاي تهاجمي و آلرژيك مي شوند. بيش از 200 گونه Aspergillus شناسايي شده است، كه 18 گونه آن براي انسان بيماري زا مي باشند. گالاكتومانان يكي از مولكول هاي مهم در قارچ بيماري زا و فرصت طلب Aspergillus fumigatus محسوب مي شود. گالاكتومانان در بدن ميزبان نيز توسط قارچ توليد شده و به عنوان يك ساختار آنتي ژني براي A. fumigatus مطرح مي باشد. هدف اصلي از انجام اين مطالعه شناسايي گالاكتو مانان بود، از اين رو A. fumigatus سويه AF-293 در محيط كشت سابوراد مايع در 3 حالت مختلف از نظر شرايط دمايي كشت داده شد. پس از خالص سازي گالاكتومانان، نمونه ها توسط ژل SDS-PAGE مورد ارزيابي قرار گرفتند. سپس گالاكتومانان پروتيين با تكنيك نقره رنگ آميزي شده و توسط تكنيك الكترو بلاتينگ مورد ارزيابي قرار گرفت. نمونه هاي سرم از 15 بيمار مشكوك به عفونت آسپرژيلوسي در اين مطالعه مورد استفاده قرار گرفتند. سرم ها به منظور حضور آنتي بادي بر عليه گالاكتومانان پروتيين A. fumigatus توسط تكنيك ELISA غير مستقيم مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج حاصله نشان دادند كه گالاكتو مانا پروتيين در بخش 60 كيلو دالتون حضور دارد. از سوي ديگرنتايج حاصل از ELISA غير مستقيم نيز نشان داد كه گالاكتومانان پروتيين مي تواند به صورت آنتي ژني با سرم بيماران واكنش دهد.

Aspergillus spp are ubiquitous opportunistic moulds that cause both allergic and invasive syndromes.The genus comprises approximately 200 species, of which 18 have been associated with human disease. Glactomannan (GM) is an essential molecule in the life of the human opportunistic fungal pathogen Aspergillus fumigatus. GM is also produced in the host and is a well-known A. fumigatus antigen. The main aim of this study was identification of Galactomannoprotein, therefore A. fumigatus strain AF-293 was cultivated in Sabouraud’s liquid medium in three different conditions. After identification of Galactomannoprotein, samples were analyzed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrorhoresis (SDS-PAGE). GMPs stained with silver staining technique or electrotransferred to nitrocellulose. Serum samples from 15 patients were used through this study. Sera from patients were analyzed for the presence of antibody to A. fumigatus GMP by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method. Results illustrated that GMP had a molecular weight 60 kDa. In addition, ELISA results showed that GMP can interact with patients’ sera as an antigen.