بررسي سرولوژيكي و مولكولي ويروس پژمردگي لكه اي گوجه فرنگي (TSWV) در استان خراسان رضوي

Serological and Molecular Detection of Tomato spotted wilt virus (TSWV) in Khorasan Razavi Province

به منظور بررسي ويروس پژمردگي لكه اي گوجه فرنگي Tomato Spotted Wilt Virus(TSWV) در سال هاي زراعي 1387 و 1388 از مزارع استان خراسان رضوي ( شهرستان هاي مشهد، نيشابور، قوچان، كاشمر، تربت حيدريه، فريمان، رشتخوار، تخت جلگه ) تعداد 636 نمونه گوجه فرنگي جمع آوري شد. نمونه هايي كه داراي علايم رنگ پريدگي، بافت مردگي و لكه هاي حلقوي بودند جمع شده و در شرايط خنك به آزمايشگاه انتقال داده شدند. در آزمايشگاه به منظور ارزيابي وجود ويروس در نمونه هاي مشكوك، آزمون سرولوژيكي TAS-ELISA انجام شد و نمونه هاي آلوده به ويروس كه در آزمون الايزا مشخص شدند به 3 رقم توتون Nicotiana rustica ، Nicotiana clevelandii و Nicotiana tabacum var Samson مايه زني گرديدند و پس از ظهور علايم با آزمون TAS-ELISA آزمايش شدند. در شناسايي مولكولي نمونه هاي آلوده به ويروس با استفاده از محلول (-plus)™RNX استخراج RNA صورت گرفت و با استفاده از آغازگر اختصاصي در واكنش RT-PCR قطعه اي در محدوده باندي bp276 تكثير يافت. نتايج حاصل از آزمون TAS-ELISA و RT-PCR وجود ويروس را در مزارع گوجه فرنگي استان خراسان رضوي به اثبات رساند. در آزمون مايه زني مكانيكي ويروس مورد مطالعه تنها در توتون Nicotiana tabacum var Samson ( تغيير شكل برگ ها و ابلقي ) علايم مشخص بيماري را نشان داد.

In order to investigate the presence of Tomato spotted wilt virus ( TSWV) in tomato fields of Khorasan Razavi province ( Mashhad , Neishabour , Torbat-e-Hydarieh , Kashmar , Ghochan , Fariman , Takht-e-Golgeh and Roshtkhar ), totally 636 samples were collected from tomato fields in summer of 2008 and 2009 . The plant that showed symptoms of chlorotic , necrotic and ring spot were collected and transferred to the laboratory in cold condition , then tested by TAS-ELISA . Sap from infected plants inoculated to 3 cultivars of indicator plant e.g Nicotiana rustica, N . clevelandii and N. tabacum var Samsun . To confirme symptomology, inoculated indicator plants tested by TAS-ELISA. For molecular detection, RNA extracted by use of RNX TM(plus) kit . In RT-PCR , specific primer , amplified a fragment of 276 bp . Using RT-PCR and mechanical transmission tests , the presence of TSWV has been proven in tomato field of the province .In inoculating indicator plants only Nicotiana tabacum var Samsun (leaf deforming and mottling ) showed specific virus symptoms .