انتقال سازه ژن درماني توسط نانوذرات پلي پلكسي (نوع پلي اتيلن ايميني هدفمندشده) به سلول هاي سرطاني روده بزرگ

Delivery of gene therapy construct by polyplexes nanoparticle (targeted polyethyleneimine) to colon cancer cells

مقدمه و هدف: هدف از اين تحقيق، تهيه نانوذرات پلي اتيلن ايميني هدفمندشده بانانوبادي ضد TAG-72 براي انتقال سازه كدكننده ژن كشنده t-Bid به سلول هاي سرطان روده بزرگ (كولون) انساني است. مواد و روش‌ها: ابتدا نانوبادي نوتركيب تخليص شده با SDS-PAGE، وسترن بلاتينگ و الايزا تاييد شد. پلي اتيلن گليكول روي نانوذرات پلي اتيلن ايمين (PEI) سوار شد و درنهايت با اتصال كووالان نانوبادي بر سطح نانوذرات، ناقل پلي پلكسي هدفمند ساخته شد. بار سطحي و اندازه نانوذرات با استفاده از دستگاه مالورن و دستگاه نانو سايت بررسي و كارايي حامل ژني ساخته شده در انتقال ژن كشنده به رده هاي سلولي آدنوكارسينوماي روده بزرگ با آزمون Real Time PCR بررسي شد. نتايج: نتايج دستگاه مالورن، ساخت نانوذرات هدفمند با اندازه ??? نانومتر و پتانسيل سطحي 7،18+ ميلي ولت را نشان داد. با استفاده از آزمون تاخير حركت در ژل، در برگيري و فشرده سازي صحيح و مناسب سازه ژني را تاييدكرديم. نتايج Real Time PCR هدايت بيان ژن هدف به سلول هاي توموري روده بزرگ را تاييدكردند. نتيجه‌گيري: نتايج اين تحقيق، كارايي نانوذرات پلي پلكسي هدفمندشده با نانوبادي در انتقال ژن و قابليت آنها براي هدفمند سازي انتقال ژن به سلول را تاييدمي كند.

Background and Objective: The aim of this study was preparation of polyethyleneimine (PEI) nanoparticles targeted with anti-TAG72 nanobody for delivery of t-Bid gene construct into the human colonic adenocarcinoma cells. Materials and Methods: First of all, purified recombinant nanobody was verified by SDS-PAGE, western blotting and ELISA. Targeted polyplexes were constructed by reacting polyethylene glycol (PEG) with PEI and covalent bonding of nanobody to nanoparticles. Surface charge and size of the resulting nanoparticles were evaluated by Malvern zeta sizer and nanosight instruments. Efficiency of constructed gene vector for killer gene delivery into the colonic adenocarcinoma cells was assessed using real time PCR assay. Results: Production of nanoparticles with the average size of 168 nm and +7.18 surface charge was confirmed by nanosight and Malvern zeta sizer. Gel retardation assay verified the efficiency of carrier for pDNA complexation. Real time PCR results confirmed the targeted gene expression in the cancerous cell lines. Conclusion: Results of this study confirmed the efficiency of targeted polyplexes in gene delivery and their potency for targeted gene delivery into the cells.