تاثير كيفيت ماده‌ اوليه بر قابل اعتماد بودن تحليل ژنتيكي گياهچه‌هاي به‌دست آمده از كالوس سيب‌زميني

The impact of initial material quantity on reliability of DNA profilecharacterization in potato callus-derived regenerants

براي ايجاد ناپايداري كروموزومي مصنوعي در سيب‌زميني‌هاي دو رگ، كالوس برگي در محيط‌هايي با دماهاي متفاوت توليد و گياهچه‌هاي حاصل از كشت كالوس براي استخراج DNA مورد استفاده قرار گرفت. DNA با غلظتي پايين استخراج و وجود كروموزوم‌ها با كمك نشانگرهاي ريزماهواره اختصاصي هر مكان ژنومي بررسي شد. فراواني ناپديد شدن نشانگرها بسيار بالا بود، لذا وجود نشانگرها يك بار ديگر در نمونه‌هاي گلخانه‌اي بررسي شد. مشاهده شد كه ناپديد شدن نشانگرها در گياهچه‌هاي حاصل از كالوس يك پديده پايدار نبوده و دليلي به جز ناپايداري كروموزومي دارد. ناپديد شدن نشانگرها به كمك رقيق‌سازي تدريجي DNA و استفاده از آن براي واكنش‌هاي زنجيره‌اي پليمراز شبيه‌‌سازي و نتيجه گرفته شد كه دليل ناپديد شدن نشانگرها در كيفيت DNA نهفته است. سازوكارها و كاربردهاي احتمالي اين پديده مورد بحث قرار گرفت.Leaf-derived calli from Solanum hybrids were treated under different thermal regimes to induce chromosome instability. DNA extracted from callus-derived regenerants had very low yield. The chromosomes were tracked by chromosome-specific microsatellites. Marker loss was observed at a high frequency, so the possibility of technical artefacts was examined by repeating PCR for individuals with apparently lost alleles. Repeated PCRs revealed that the marker loss in initial reactions were not genuine. Marker loss was stimulated by using a manually-diluted DNA template, postulating that the tissue quality can influence the reliability of the DNA profile. Possible mechanisms of this situation are discussed.