اثر سوكروز بر ميزان بقاي فوليكول‏ها و وقوع مرگ سلولي برنامه‏ريزي شده پس از انجماد شيشه‏اي بافت تخمدان موش صحرايي

Sucrose Effect on Follicular Survival Rate and Apoptosis Incidence in Rat Ovarian Tissue after Vitrification

هدف: هدف از اين مطالعه بررسي اثر سوكروز بر ميزان زنده ماندن فوليكول‏ها و شيوع مرگ سلولي برنامه ريزي شده در بافت تخمدان موش صحرايي پس از انجماد شيشه‏اي بود. مواد و روش‏ها: تخمدان موش‏هاي صحرايي 5 هفته‏اي پس از خارج شدن از بدن به سه گروه كنترل (غير‏انجمادي)، انجمادي VI (اتيلن گليكول + دي متيل سولفوكسايد) و VII (اتيلن گليكول+ دي متيل سولفوكسايد+25/0 مول در ليتر سوكروز) تقسيم شد. پس از مرحله انجماد و ذوب، تخمدان‏ها حدود نيم ساعت انكوبه و بلافاصله در محلول بوين تثبيت و سپس به صورت سريالي برش زده شد. به منظور بررسي ريخت‏شناسي بافت و نيز شمارش تعداد فوليكول‏هاي دچار مرگ سلولي برنامه ريزي شده ، قطعات به ترتيب رنگ‏آميزي هماتوكسيلين- ايوزين و ايمونو‏هيستوشيمي تيمار شده با آنتي‏بادي anti-active & pro caspase 3 انجام شد. نتايج: مطالعات آماري نشان داد كه ميزان سالم ماندن فوليكول‏هاي در حال تكوين به استثناي فوليكول‏هاي بدوي بين گروه‏هاي انجمادي و كنترل يكسان است. فوليكول‏هاي بدوي سالم در گروه‏هاي انجمادي ضمن كاهش معني‏دار در مقايسه با كنترل، تفاوت معني‏داري را بين خود نشان ندادند. بر‏خلاف فوليكول‏هاي سالم، فوليكول‏هاي مرده در همه مراحل مختلف تكويني، افزايش معني‏داري را در دو گروه انجمادي نسبت به كنترل نشان دادند. هر چند كه اين اختلاف بين گروه‏هاي انجمادي معني‏دار نبود. در گروه‏هاي انجمادي، فوليكول‏هاي دچار مرگ سلولي برنامه ريزي شده نيز در تمامي مراحل به غير از آنترال افزايش معني‏داري را نسبت به كنترل نشان دادند. بين دو گروه انجمادي نيز به غير از مرحله فوليكولي پره‏آنترال (VI: 003/0 ± 95/1 درصد و VII: 02/0 ± 12/4 درصد، 037/0P < ) ميزان فوليكول‏هاي دچار مرگ سلولي برنامه ريزي شده يكسان بود. نتيجه‏گيري: اين نتايج نشان مي‏دهد كه حضور سوكروز يا عدم حضور آن در فرآيند انجماد شيشه‏اي تخمدان موش صحرايي، به خصوص براي حفظ فوليكول‏هاي بدوي و اوليه كه در فرآيند پيوند از اهميت خاصي برخوردار است تفاوت چنداني را ايجاد نمي‏كند.

Objective: the aim of this study was to evaluate the effect of sucrose on follicular survival rate and the incidence of apoptosis in rat ovarian tissue following vitrification. Methods: Ovaries of approximately 5-week-old female Wistar rats were divided randomly into three groups: control (non-vitrified), VI (Ethylene Glycol + Dimethyl Sulfoxide) and VII (EG + DMSO + 0.25 mol/lit sucrose). Vitrified-warmed samples were incubated for approximately 30 minutes and fixed in Bouin’s fixative. The samples were serially sectioned and stained either with H&E or immunohistochemistry kit of anti-active and a pro-caspase-3 kit. Results: Data analysis showed that the rate of growing follicles that survived, with the exception of primordial follicles, was comparable between the vitrified-warmed and control samples. Morphologically healthy primordial follicles showed significant reductions in all vitrification groups compared to the control, however this rate was not significant between the vitrification groups. In comparison with healthy follicles, there were significantly more dead follicles in the vitrification groups than the control group. In addition the apoptotic follicles increased significantly after vitrification, with the exception of the antral follicles. Although the number of apoptotic follicles was similar between both vitrification groups, however there were significantly more pre-antral apoptotic follicles in the VII group compared to the VI and control groups. Conclusion: According to these results, the presence or absence of sucrose has no significant effect on the preservation of primordial and primary follicles which are important for transplantation.