بهينه‏سازي استخراج و تكثير microRNA هاي mir-21، mir-141 و mir-205 در ادرار بيماران مبتلا به سرطان مثانه

Optimization of extraction and amplification of microRNAs (mir-21, mir-141 and mir-205) in urine samples of patients with bladder cancer

هدف: در حال حاضر روش‏هاي تشخيص سرطان مثانه از حساسيت و اختصاصيت لازم برخوردار نيست؛ بنابراين يافتن نشانگر هاي تومور جديد كه حساسيت و اختصاصيت بالايي داشته باشد مورد توجه قرار گرفته است. microRNA ها (miRNA, miR) گروه بزرگي از RNA هاي كوچك مولكول و غيركدكننده است كه نقش مهمي در كنترل بيان ژن‏ها دارد. مطالعات اخير نشان داده است كه الگوي بيان miRNA ها در سلول‏هاي سرطاني به‏طور معني‌داري تغيير مي‌كند. اين تغييرات، در اكثر سرطان‏ها اختصاصي و وابسته به نوع سرطان است. هدف از اين مطالعه بهينه‌يابي روش استخراج RNA كل حاوي miRNA ها از ادرار و استفاده از آن به‏عنوان يك روش تكرارپذير در بررسي حضور miRNA ها در ادرار مبتلايان به سرطان مثانه است. مواد و روش‏ها: RNA كل از ادرار مبتلايان به سرطان مثانه و گروه كنترل با استفاده از محلول RNX و تريزول LS به دو روش اصلي و تغيير يافته استخراج شد. حضور miRNA هاي با وابستگي احتمالي به سرطان مثانه به روش Real-Time در اين نمونه‌ها بررسي شد. نتايج: روش‏هاي RNX و تريزول LS تغيير يافته، روش‏هاي مناسبي براي استخراج RNA از نمونه‏هاي ادرار است. سطح mir-21 در RNA هاي استخراج شده به روش تريزول LS تغيير يافته بالاتر از روش RNX بود. قابل ذكر است كه مقايسه نمونه‏هاي ادرار منجمد و غيرمنجمد نشان دهنده سطح بالاتر microRNA ها در نمونه‌هاي منجمد بود. نتيجه‏گيري: در اين مطالعه روشي آسان، تكرارپذير و قابل اعتماد براي تشخيص تكثير miRNA ها در نمونه‏هاي ادراري به‏دست آمد. براساس اطلاعات miRNA ها نشانگرهاي مناسبي براي تشخيص اوليه و غربالگري سرطان مثانه است.

Objective: The current methods for bladder cancer diagnosis suffer from low sensitivity and specificity. Therefore, finding a novel tumor markers with high specificity and sensitivity is of great interest. MicroRNAs (miRNA, miR) are small endogenously-produced, non-coding RNAs with an important role in regulating gene expression. Recent studies show that miRNAs expression profiles represent significant tumor-specific changes that are unique for most cancers. The aim of this study was to optimize miRNA containing total RNA extraction from urine and use it as a reliable and repeatable technique for miRNA detection in urine of patients with bladder cancer. Materials and Methods: Total RNA was extracted from the urine of patients with bladder cancer and normal individuals using RNX and Trizol solutions with and without modifications of original protocols. Real-time quantitative RT-PCR was then used to detect miRNAs with a potential link to bladder tumorigenesis. Results: RNX and the modified Trizol are practical methods for RNA extraction from urine samples. The mir-21 amplification of the extracted RNAs using modified Trizol method was more efficient than that of RNX method. It is noteworthy that, the levels of miRNAs expression were much higher in the frozen urines compared to the fresh ones. Conclusion: We have succeeded to set-up a protocol to easily amplify miRNAs in urine samples. Based on the data, microRNAs seem to be good biomarkers for early detection and screening of bladder cancer.