ارزيابي بيان ژن هموباكس ديودنال 1 در سلول هاي توليد كننده انسولين، مشتق از سلول هاي بنيادي كارسينوماي جنيني

Evaluation of pdx-1 gene expression in insulin producing cells, derived from embryonal carcinoma stem cells

زمينه و هدف: درك عملكرد سلول هاي بتا در سطح مولكولي به احتمال زياد توسعه تكنيك هاي توليد سلول هاي بتا را تسهيل مي كند. اين مطالعه با هدف بررسي بيان ژن هوميوباكس ديودنال 1 (pdx-1) در سلول هاي تمايز يافته طراحي و اجرا شد. روش بررسي: اين مطالعه بنيادي-كاربردي بر روي تمايز سلول‌هاي بنيادي به سلول‌هاي انسولين‌ساز انجام گرفت. محيط ثانويه حاصل از كشت پانكراس نوزاد يك هفته‌اي موش براي تمايز سلول‌هاي P19 استفاده شد. اجسام شبه جنيني (EBs) با كشت معلق 24 ساعته سلول‌هاي P19 تشكيل شدند. براي القاي تمايز، غلظت‌هاي متفاوت محيط ثانويه (25%، 50%، 75% و 100%) به محيط كشت اضافه شد. جهت شناسايي سلول‌هاي تمايز يافته مشتق از EBs در شرايط آزمايشــگاهي از رنگ آميزي ديتيزون استفاده شد. توليد انسولين-پروانسولين و رسپتور بتاي انسولين در اين سلول ها به روش ايمنوفلورسنس تعيين و بيان ژن pdx-1 به وسيله واكنش زنجيره پلي‌مراز-رونويسي معكوس ارزيابي شد. داده ها با استفاده از آزمون هاي آماري آناليز واريانس يك طرفه و دانكن تجزيه و تحليل شدند. يافته‌ها: پس از هفت روز القا، دستجات سلولي تمايز يافته ظاهر شدند. اوج پاسخ‌گويي تمايزي مربوط به غلظت 50% از محيط ثانويه بود. بيان ژن pdx-1 در دستجات سلولي تمايز يافته مشاهده شد. بيان نشانگرهاي انسولين-پروانسولين و رسپتور بتا در سلول‌هاي تمايز يافته به روش ايمنوفلورسنس اثبات شد. نتيجه‌گيري: محيط ثانويه پانكراس باعث تمايز سلول‌هاي P19به سلول‌هاي انسولين ساز ‌‌شد، لذا نتايج اين مطالعه مي تواند توليد سلول هاي بتا را از سلول هاي بنيادي تسهيل نمايد.

Background and aims: Understanding B-cell function at the molecular level will likely facilitate the development of B-cells manufacture techniques. The aim of the present study was to investigate the pancreatic and duodenal homeobox 1 (pdx-1) gene expression into DTZ-stained cellular clusters originating from emberyonal carcinoma cells. Methods: This implemental -fundamental study was accomplished on differentiation of stem cells into insulin producing cells (IPCs). The conditioned medium of cultured pancreas from one-week newborn mouse was used for differentiation of P19. EBs formed by a 24h suspension culture of P19 EC cells. In order to induce the difrentiation,, different concentrations of conditioned medium (25%, 50%, 75% and 100%) were added to culture medium. Dithizone staininig was used for detecting the differentiated cells derived from EBs in vitro. Insulin-proinsulin production and insulin receptor beta were determined by immuno?uorescence. The expression of pdx-1 gene was also analyzed by reverse transcriptase-polymerase chain reaction. Data were analyzed using one way ANOVA and Dunkana test. Results: Differentiated cell clusters appeared after approximately 7 days induction. The peak response of differentiation was at the concentration of 50% conditioned medium. Expression of pdx-1 gene was observed in the differentiated cell clusters. Expression of insulin-proinsulin and insulin receptor beta markers in the differentiated cells was confirmed by immuno?uorescence. Conclusion: The pancreas conditioned medium could influence P19 cells differentiation into insulin producing cells. So findings of this study could facilitate producing the B-cells.