جداسازي و شناسايي مولكولي لاكتوباسيل هاي موجود دربرخي از فرآورده هاي لبني بومي

Isolation and identification of indigenous Lactobacilli in traditional dairy products in Iran

يكصد و دوازده نمونه فراورده هاي لبني از قبيل ماست، دوغ و شيرخام از مناطق بكر استان هاي كرمانشاه، كردستان، لرستان، ايلام و مركزي جمع آوري شد. جداسازي باكتري ها بر مبناي روش هاي استاندارد بين المللي انجام شد. پس از انجام كشت هاي متوالي بر روي محيط هاي اختصاصي با كسب كلني هاي تيپيك و مشاهده ميكروسكوپي، نود و سه باكتري براي آناليزهاي بعدي انتخاب شدند. به منظور شناسايي بيوشيميايي سويه ها تخمير 19 قند، همچنين رشد در دماي 15 و 45 درجه سلسيوس، احيا نيترات، ذوب ژلاتين و واكنش در برابر اسكولين بررسي شد. به منظور تاييد نتايج بيوشيميايي، آناليزهاي مولكولي مانند تكثير قطعاتي از DNA با آغازگرهاي مخصوص جنس انجام و تعلق اين باكتري ها به جنس لاكتوباسيل تاييد شد. همچنين ژن 16S rDNA كامل چهار باكتري با ويژگي هاي خاص تكثير و پس از توالي يابي در بانك ژن NCBI ثبت گرديد. پس از مقايسه توالي هاي مذكور با توالي ديگر باكتري هاي ثبت شده در اين بانك، درخت فيلوژني رسم گرديد. نتايج نشان داد كه دو باكتري مورد بررسي متعلق به گونه جديد L.crustorum است كه در سال هاي اخير گزارش شده است.

One hundred and twelve traditional dairy samples including yoghurt, doogh and raw milk were collected from Kermanshah, Kurdistan, Lorestan, Ilam and Markazi provinces in Iran. The bacteria were isolated based on standard procedure. The samples were sub-cultured on selective media, typical colonies were examined microscopically and finally ninety three bacteria were selected for further analyses. The isolated bacteria were characterized by fermentation of 19 sugars and growing in 15 and 45 ?C, nitrate reduction, gelatin solidification and esculin degradation. In order to confirm the biochemical results, molecular analysis such as amplification of lactobacillus genus specific fragment with specific primer was carried out. The results showed that all isolates belong to lactobacillus. Four lactobacillus with specific properties were further identified by amplification and sequencing of 16S rDNA gene. These genes were submitted to gene bank in NCBI. The phylogenetic tree was constructed after comparing with other 16S rDNA genes. Results showed that two strains were similar to Lactobacillus crustorum which was recorded recently.