بررسي اثرسايتوتوكسيك عصاره تام هيدرومتانولي حاصل از چاي سياه ارتودكس ايراني بر سلولهاي سرطاني KB (مدل سلولي اسكواموس سل كارسينوما)

Evaluation of Cytotoxic Activities of Iranian Orthodox Black Tea Extract (BTE) on Oral Squamous Cell Carcinoma (KB cell line)

خلاصه: سابقه و هدف: چاي سياه ارتودكس ايراني متعلق به خانواده Theaceae مي‌باشد كه به طور گسترده در جامعه و طب سنتي ايران مورد استفاده قرار مي‌گيرد. مطالعه حاضر با هدف بررسي اثر سايتوتوكسيك عصاره هيدرومتانولي تام حاصل از چاي ارتودكس ايراني بر سلولهاي سرطاني KB (مدل سلولي اسكواموس سل كارسينوما) و القاي آپوپتوز بر روي آنها انجام گرديد. مواد و روش‌ها: مطالعه بصورت تجربي و آزمايشگاهي بر روي سلول‌هاي سرطاني KB به عنوان مدل سلولي اسكواموس سل كارسينوماي دهاني انجام شد. برگ‌هاي چاي سياه با روش ماسراسيون به كمك حلال هيدرومتانولي 70 درصد عصاره‌گيري شدند. ميزان سميت و درصد بقاي سلولي غلظت هاي مختلف عصاره تام بر روي سلولهاي كشت داده شده، در طي 24 ساعت با استفاده از روش MTT اندازه گيري شد. روش الايزا براي مطالعه القاي آپوپتوز در زمان 24 ساعت در غلظت هاي 50IC از عصاره هيدرومتانولي انجام شد. علاوه بر اين جهت تاييد القاي مرگ سلولي آپوپتوز در سلول‌هاي تيمار شده، تست الايزا وTUNEL انجام گرديد. جهت تجزيه و تحليل داده ها از آزمون ANOVA استفاده شد. يافته‌ها: نتايج تست MTT نشان داد كه عصاره هيدرومتانولي چاي سياه ارتودكس ايراني توانايي مهار رشد و خاصيت سايتوتوكسيك در سلولهاي سرطاني KB را در تمام غلظت‌ها دارد. در بررسي24ساعته غلظت 50 IC براي عصاره هيدرومتانولي برابر با 4/12± 08/446ميكروگرم بر ميلي ليتر بود و القاي آپوپتوز در سلول هاي سرطاني در اين غلظت 34 درصد گزارش شد. نتيجه‌گيري: عصاره هيدرومتانولي چاي سياه ارتودكس ايراني در تمام غلظت‌ها موجب مهار رشد و مرگ سلول‌هاي رده سرطاني اسكواموس سل كارسينوم به شكل آپوپتوز مي‌شود.

Abstract: Background and Aim: Iranian orthodox black tea extract has been used widely in Iranian traditional medicine and society. The present investigation was carried out to study the induction of apoptosis and cytotoxic effects of hydromethanolic crude extract of Iranian orthodox black tea against oral squamous cell carcinoma (KB cell line). Materials and Methods: This experimental In vitro study was done on KB cells which were used as a model for oral squamous cell carcinoma cells. Collected leaves were dried and powdered, then were soaked in 70% hydromethanol solvents. The cytotoxic rate and viability percentage of different concentration of crude extract on cultured cells were measured using the MTT assay. ELISA assay was used to measure the induction of apoptosis after 24 h in IC50 of hydromethanolic crude extract. Also, TUNEL test was applied to confirm the induction of apoptosis in treated cells. ANOVA test was used for the analysis of required data. Results: : MTT assay result revealed that hydrometanolic crude extracts of Iranian orthodox black tea had growth inhibitory and cytotoxic activity on oral squamous cell carcinoma (KB cell line). After 24 h, IC50 of hydromethanolic crude extract was 446.08±12.4 ??g/mL. ELISA assay results revealed the induction of aptosis to be 34%. Conclusion: Iranian orthodox black tea extract can exert growth inhibition and induce cell death apoptosis on oral squamous cell carcinoma in all concentrations. Key word: Orthodox; Came llia sinesis; cytotoxicity; apoptosis; Cell ; KB; Hela KB cell