تشخيص بروسلا آبورتوس و بروسلا ملي تنسيس در شير گاوها و گوسفندان استان كردستان با استفاده از واكنش زنجيره‌اي پليمراز

Diagnosis of Brucella abortus and Brucella melitensis in the Milk of Cattle and Sheep in Kordestan Province by Polymerase Chain Reaction

بروسلوز يكي از بيماري هاي مهم مشترك بين انسان و دام مي باشد. بيماري از بسياري كشورها گزارش و در تعدادي از كشورها و ايران بومي است. مصرف شير و فرآورده هاي آلوده ي دامي يكي از راه هاي اصلي انتقال بيماري به انسان مي باشد. با توجه به اينكه در اغلب استان هاي ايران مانند كردستان گله هاي گاو و گوسفند در كنار هم نگهداري مي شوند و ممكن است دام ها به گونه هاي غير اختصاصي بروسلا آلوده شوند، هدف مطالعه حاضر استفاده از واكنش زنجيره اي پليمراز براي نشان دادن آلودگي شير و وضعيت ميزبان-هاي غير ترجيحي بروسلا آبورتوس و بروسلا ملي تنسيس در گاو و گوسفند مي باشد. در اين مطالعه تعداد60 نمونه شير از گاو و50 نمونه از گوسفند مشكوك به بروسلوز از روستاهاي شهرستان هاي كامياران-مريوان و سنندج اخذ گرديد. DNA به صورت مستقيم از نمونه هاي شير استخراج گرديد. آزمون PCR با استفاده از پرايمر هاي B4 و B5 به منظور تشخيص جنس بروسلا و با استفاده از پرايمر هاي B. a و B. m و IS711 به منظور تشخيص بعضي از بيووارهاي گونه هاي آبورتوس و ملي تنسيس انجام گرفت. با انجام PCR جهت تشخيص جنس بروسلا از نمونه هاي جمع‌آوري شده در شير گاوها20 مورد و در شير گوسفند ها 22 مورد مثبت بود. از 20 نمونه مثبت گاوي 9 نمونه به عنوان بروسلا آبورتوس بيووار (1، 2 و 4) و 2 نمونه به عنوان بروسلا ملي تنسيس شناسايي شد. از 22 نمونه مثبت گوسفندي در 15 نمونه بروسلا ملي تنسيس و 1 نمونه به عنوان بروسلا آبورتوس بيووار (1، 2 و 4) شناسايي شد. نظر به اينكه در 2 راس گاو، بروسلا ملي تنسيس و در 1 راس گوسفند بروسلا آبورتوس، شناسايي شد، بنابراين در گله هايي كه در ارتباط نزديك با يكديگر نگهداري مي شوند ممكن است دام ها به گونه‌هاي غير ترجيحي خود آلوده شوند. با توجه به نتايج مطالعه حاضر پيشنهاد مي شود جهت تشخيص بروسلاها در نمونه شير، با استفاده از پرايمر هاي اختصاصي كه قادر باشند تمام بيووارهاي بروسلا آبورتوس و بروسلا مليتنسيس را تشخيص دهند از واكنش زنجيره‌اي پليمراز در كنار كشت استفاده شوند.

Brucellosis is an important zoonotic disease in humans and animals. Brucellosis has been reported from most countries , but in some countries including Iran the disease is endemic. Consumption of milk and products of infected animals is a major transmission source of infection to humans. Since in most provinces of Iran such as Kurdestan province, cattle and sheep are kept close together, it is possible that animals are infected with non-specific Brucella species. The aim of this study was to use PCR in detection of Brucella species in milk, and also to detect the host specificity of Brucella abortus and Brucella melitensis in cattle and sheep. In this research, 60 milk samples from suspected cattle and 50 milk samples from suspected sheep in different villages of Kurdestan province were collected. DNA was extracted from all milk samples directly. In order to detect the Brucella spp. PCR was carried out using B4 and B5 primers on all extracted DNAs and in order to detect the B. abortus and B. melitensis, PCR was carried out with B. a, B. m and IS711 primers on all DNAs. Using PCR for detection of Brucella spp.20 and 22 of milk samples were positive in cattle and sheep samples respectively. Using PCR, out of the 20 cattle positive samples, 9 samples were identified as B. abortus (biovar 1, 2 and 4), and 2 samples were identified as B. melitensis. Also out of the 22 sheep positive samples, 15 samples were identified as B. melitensis and 1 as B. abortus (biovar 1, 2 and 4). Regarding the fact that in two milk samples of cattle, B. melitensis and in 1 milk sample of sheep, B. abortus were detected, the animals that were kept in close contact with each other may lose the host -specificity. Based on the results of this research, it is recommended that in order to detect Brucella spp. in milk samples. The vaccination status should be detected and using specific primers for detection of all biovars of Brucella abortus and Brucella melitensis, PCR and cultural methods should be carry out.