مقايسه روش طيف سنجي جرمي MALDI-TOF با روش هاي ملكولي و بيوشيميايي در شناسايي انتروكوكوس فسيوم و انتروكوكوس فكاليس جداشده از نمونه هاي بيمارستاني

Comparing MALDI-TOF Mass Spectrometry with Molecular and Biochemical Methods in Identifying Enterococcus Faecium and Enterococcus FaecalisIsolated from Clinical Samples

چكيده زمينه و هدف: انتروكوكوس ها باكتري‌هاي گرم مثبتي هستند كه به عنوان فلور نرمال در روده انسان، محصولات لبني و محيط اطراف حضور دارند ولي در سال‌هاي اخير به عنوان يك بيماريزاي مهم فرصت طلب در عفونت‌هاي بيمارستاني ظهور كرده‌اند. در اين مطالعه به بررسي و مقايسه كارآمدي روش نوين طيف سنجي جرمي MALDI-TOF در انتروكوكوس فكاليس و انتروكوكوس فسيوم پرداخته شده است و با روش‌هاي بيوشيميايي و ملكولي مورد استفاده در تشخيص مقايسه شده است. روش بررسي: 75 نمونه كلينيكي مشكوك به انتروكوكوس جهت بررسي بيوشيميايي، ملكولي و طيف سنجي جذبي انتخاب شدند و با آزمون‌هاي بيوشيميايي هيدروليز اسكولين، كاتالاز، وجود پيروليدونيل آمينوپپتيداز، رشد در مجاورت 5/6درصد نمك، حركت، رشد در محيط حاوي 04/0درصد تلوريت، و تست قندهاي ال-آرابينوز و سوربيتول مورد بررسي قرار گرفتند. سپس با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي بوسيله واكنش زنجيره اي پليمراز مورد بررسي و با استفاده از دستگاه طيف سنجي جرمي و نرم افزار بيوتايپر مورد تحليل قرار گرفتند. يافته ها: در 30 نمونه انتروكوكوس فسيوم، در 42 نمونه انتروكوكوس فكاليس و در 3 نمونه عفونت با هر دو باكتري شناسايي شدند. در روش‌هاي بيوشيميايي 2 نمونه انتروكوكوس فسيوم تست آرابينوز منفي و در يك نمونه انتروكوكوس فكاليس تست تلوريت منفي بود. در بررسي با استفاده از واكنش زنجيره اي پليمراز تمامي نمونه‌ها به درستي تشخيص داده شدند ولي در 2 نمونه با وجود تكرار، باندهاي قابل افتراق مشهودي نداشتند. در بررسي با استفاده از طيف سنجي جرمي در تمامي نمونه‌ها تمامي آزمون‌ها و تكرارها با قابليت افتراق بالا و به درستي شناسايي شدند. نتيجه گيري: با توجه به نتايج اين بررسي روش طيف سنجي جرمي MALDI-TOF روش قابل اطمينان و دقيقي مي‌باشد كه در شناسايي انتروكوكوس فكاليس و انتروكوكوس فسيوم قادر به تشخيص با حساسيت 100درصد مي‌باشد و با روش‌هاي بيوشيميايي و ملكولي از نظر سرعت اجرا و دقت قابل مقايسه مي باشد. واژه هاي كليدي: انتروكوكوس فكاليس، انتروكوكوس فسيوم، طيف سنجي جرمي

Abstract Background and Objective: Enterococci are the gram-positive bacteria existing in the intestines of humans(as a normal flora), indairy products and in our environment that they have emerged asan importantcauseofopportunistic nosocomial infections in recent years. In this study, we aimedat investigatingand comparing theefficiency of MALDI-TOF mass spectroscopy method through biochemical and molecular methods for detecting Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium. Material and Methods:the clinical samples (N=75) collected for biochemical, molecular and mass spectroscopy investigation were examined by Esculin hydrolysis, Catalase, Pyrrolidonylaminopeptidase, 6.5% NaCl, Motility, 0.04% Tellurite, L-Arabinose and Sorbitol. Then, they were assessed by using Allele specific PCR and analyzed by MALDI-TOF mass spectroscopy and Biotyper software. Results:thirty samplesof Enterococcusfaeciumand 42of Enterococcusfaecalisare detectedand in three sample both of them recognized. In biochemical analysis, two isolates of E. faeciumare Arabinose negative and one of E. faecalisis Telliurite negative. Also in PCR results, two of the samples do not have any clear bonds. In mass spectroscopy analysis, allstrains are correctly detected and well defined. Conclusion: According to the results of present study, MALDI-TOF mass spectrometry is a reliable and accurate method that can easily and quickly identify Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis, with a sensitivity of 100%. This procedure can be compared tomolecular and biochemical methods, based on the exactness and rapidity of performance. Key words: Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, MALDI-TOF, mass spectrometry,