شناسايي جنسيت جنين انسان از طريق پلاسماي مادر باردار از هفته هشتم به بعد بوسيله Nested-PCR

Prenatal diagnosis of fetal sex by molecular analysis of maternal plasma after 8 weeks of gestation

سابقه و هدف: تشخيص پيش از تولد(Prenatal Diagnosis) جنسيت جنين، نيازمند روش هاي تهاجمي نظير نمونه‌گيري از طريق آمنيوسنتز و نمونه‌گيري از پرزهاي كوريوني(CVS) مي‌باشد. در سال هاي اخير، يكي از روشهاي غير تهاجمي بررسي حضور DNA سلولهاي هسته‌دار جنيني در پلاسماي خون مادر است كه در اين تحقيق مورد بررسي قرار گرفت. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي، سيستم Nested-PCR براي تشخيص ژن SRY جنيني با بكارگيري DNA جنيني از پلاسماي خون مادر باردار طراحي و بهينه سازي گرديد. نمونه هاي خوني 32 زن باردار در هفته هاي 13-8 آبستني جمع آوري و سپس DNA سلولها به روش فنل/كلرفرم استخراج گرديد. در سيستم Nested-PCR، ژن SRY با دو جفت پرايمر طراحي شده تكثير شد. حضور توالي هاي كروموزوم Y در پلاسماي خون مادر نشان دهنده جنسيت پسر جنين و در صورت فقدان آن نشان دهنده جنسيت دختر بود. يافته ها: از 32 زن باردار، پس از تكثير ژن SRY به روش Nested-PCR، در 14مورد نتيجه مثبت بود، بطوري كه در 18زن داراي جنين دختر نتايج مثبت ديده نشد و نتايج به دست آمده حساسيت 5/87 درصد را نشان داد. نتيجه گيري: روش استخراج فنل/كلرفرم يك روش ساده و موثر براي جدا سازي DNA جنين از پلاسماي خون مادر مي باشد و روش Nested-PCR روشي غير تهاجمي ارزان و دردسترس براي براي تشخيص پيش از تولد مي باشد . واژگان كليدي: تشخيص پيش از تولد، DNA جنيني در پلاسماي مادر ، Nested-PCR، ژن SRY .

Background: Prenatal diagnosis of fetal sex is usually performed by invasive methods such as sampling through amniocentesis or chorionic villus sampling. One potential non-invasive approach involves analysis of cell-free fetal DNA in maternal plasma or serum. The objective of our study was to investigate the feasibility of using fetal DNA in maternal plasma for prenatal diagnosis of fetal sex. Materials and Methods: In this experimental study, a nested polymerase chain reaction (PCR) technique was developed for fetal SRY gene identification using cell-free fetal DNA in maternal plasma. Peripheral blood samples were obtained from 32 pregnant women at the gestational period from 8 to 13 weeks and cell-free DNA was extracted by the phenol/chloroform method from plasma. The nested PCR was carried out to amplify the fragment of SRY gene by two sets of PCR primer pairs. Analysis was then performed on the PCR product. Specifically, the presence of Y-chromosome sequences in maternal blood plasma indicates that the fetus is male, whereas lack of a signal will indicate that the fetus is female. Results: Among the 32 pregnant women, SRY sequences were detected in 14 plasma samples after nested PCR amplification, while the 18 women bearing female fetuses had the negative results. The sensitivity of this technique was 87.5%. Conclusion: The phenol/chloroform extraction of fetal DNA in maternal plasma is an effective and simple method, and the nested PCR amplification of SRY sequence is a convenient and low-cost approach for the non-invasive early prenatal diagnosis of fetal sex. Keywords: Prenatal diagnosis, Fetal sex, nested PCR, SRY gene.