بررسي پاره‌اي از خصوصيات بيولوژيكي و مولكولي ويروس رگه‌اي توتون Tobacco streak virus جدا شده از آفتابگردان

Study on some Biological and Molecular Characterization of Tobacco streak virus Isolated from Sunflower

ويروس رگه‌اي توتون (Tobacco streak virus -TSV) يكي از ويروس‌هاي آلوده كننده آفتابگردان مي‌باشد. طي دو سال زراعي 86_87، از مزارع آفتابگردان استان‌هاي آذربايجان غربي، اصفهان، تهران، قم، مركزي و همدان تعداد 520 نمونه جمع آوري شد. گياهان آلوده نمونه برداري شده داراي علايم مختلف شامل: پيچيدگي و بد شكلي برگها، وجود لكه‌هاي كلروزه و نكروزه در برگ و توقف رشد در بوته بود علاوه بر آن تعدادي از نمونه‌ها بدون علايم بودند. براي شناسايي ويروس از آزمون DAS-ELISA استفاده شد. به منظور تعيين دامنه ميزباني ويروس جدايه اصفهان ويروس بر روي 13 گونه گياهي از 5 خانواده (Chenopodiaceae, Solanaceae, Amaranthaceae, Asteraceae, Papilionaceae) در مرحله حساس گياه مايه زني شد. علايم روي سلمه تره (Chenopodium amaranticolor, C. quinoa) و لوبيا چشم بلبلي (Vigna unguiculata) به صورت لكه‌هاي كروتيك موضعي، روي داتوره (Datura stramonium)، آفتابگردان (Helianthus annuus)، گل تكمه‌اي (Gompherna globosa) و باقلا (Vicia faba) به صورت پيچيدگي و بدشكلي در برگها و در نهايت كوتولگي عمومي در بوته و در گياه توتون (Nicotiana benthemiana) بدون علايم ظاهري بود. اين ايزوله روي باقلا تكثير و خالص سازي شد. در آزمون SDS-PAGE وزن پروتيين پوششي ويروس 9/30 كيلو دالتون تعيين گرديد. با استفاده از آنتي سرم اختصاصي ويروس در آزمون وسترن بلات اين باند به عنوان پروتيين پوششي ويروس تاييد شد. با استفاده از جفت آغازگر اختصاصي كه توسط Bath و همكاران طراحي شده بود، در آزمون RT-PCR و IC-RT-PCR قطعه‌اي به طول 717 جفت باز تكثير شد.

During 2007-2008 growing season, a total of 520 sunflower leaf samples with symptoms like vein clearing, cholorotic and necrotic local lesion, deformation and stunting which were suspected of being infected with Tobacco streak virus (TSV) were collected from sunflower fields of Azarbayijan-gharbi, Isfahan, Qom, Markazi, Tehran and Hamedan provinces. Infection with TSV in collected samples were determined serologically by enzyme – linked immunosorbent assay (DAS- ELISA) using a polyclonal antiserum. It was determined that 124 samples were infected with TSV. The percentage of TSV infection in sunflower fields of Azarbayijan-gharbi, Hamedan, Tehran, Qom, Isfahan and markazi provinces were 56%, 31%, 26%, 14%, 8.8% and 0% respectively. The virus was propagated on maintenance hosts. TSV induced cholorotic local lesions symptoms on inoculated leaves of Chenopodium quinoa, C. amaranticolor and Vigna unguiculata. The virus caused systemic stunting , deformation and curl on leaves of Datura stramonium, Gomphrena globosa, Helianthus annuus and Vicia faba. Nicotiana benthemiana was symptomless. The molecular weight of coat protein under denaturing condition (SDS-PAGE) was estimated to be 30.9 KD and Western blot confirmed the result of SDS-PAGE. IC- RT- PCR and RT- PCR were performed using a specific primer pair of TSV which had been designed according to a part of coat protein, and a fragment with 717 length was amplified.