شناسايي آنزيم ‌توماتيناز با تكنيك كروماتوگرافي لايه نازك در جدايه‌هاي نژاد1 قارچ Fusarium oxysporum f.sp lycopersici عامل پژمردگي آوندي گوجه فرنگي در استانهاي خراسان شمالي و رضوي

Investigation of Tomatinase Enzyme Using Thin Layer Chromatography(TLC) in Population of Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici Race1 from Tomato in Northern Khorasan and Razavi Khorasan Provinces

اين تحقيق با هدف شناسايي آنزيم tomatinase در جدايي‌هاي نژاد فيريولوژيك 1 قارچ Fusarium oxysporum f.sp lycopersici عامل پژمردگي آوندي گوجه فرنگي در استانهاي خراسان شمالي و رضوي با تكنيك TLC انجام شد . بدين منظور در طي فصل زراعي 89-88 از مناطق عمده گوجه كاري استانهاي فوق نمونه برداري صورت گرفت، و 20 جدايه قارچ FoL از بافت آوندي ريشه، طوقه و ساقه گياهان گوجه فرنگي آلوده جداسازي گرديد. آزمون اثبات بيماريزايي روي گوجه فرنگي رقم Bonny Best (حساس عمومي ) انجام شد و 17 جدايه بيماريزا كه باعث پژمردگي آوندي مي‌شدند تشخيص داده شد. آزمون اثبات فرم اختصاصي جهت تاييد بر اختصاصي بودن جدايه‌هاي بيماريزا با استفاده از گوجه فرنگي رقم (Bonny Best)، تاتوره، تاجريزي و نخود انجام گرديد كه اين جدايه‌ها تنها بر روي گوجه فرنگي پژمردگي ايجاد نمودند. تعيين نژاد فيزيولوژيك نيز با استفاده از ارقام افتراقي انجام كه همه جدايه‌ها مطابق جدول استاندارد علايم بيماري در نژاد 1 قرار گرفتند. براي شناسايي آنزيم tomatinase، ابتدا سوسپانسيوني از اسپورهاي قارچ تهيه و پس از آن عصاره گيري پروتيين‌هاي قارچ انجام شد و بعد از خالص سازي توسط تيوبهاي دياليز با استفاده از تكنيك TLC(كروماتوگرافي لايه نازك) و به كمك تركيبات استاندارد tomatidine وtomatine- آنزيم tomatinase شناسايي گرديد

This study was carried out of identify the tomatinase extracellular enzyme in Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici Race1 the casual agent of wilting in tomato. 20 isolates of Fusarium oxysporum were recovered from infected roots,crown and stems of tomato plants collected from fields in major tomato producing areas in Northern and Razavi Khorasan province during 2009-2010 . Pathogenicity test done on cultivar Bonny Best and 17 isolates were pathogenic on tomato and 3 isolates were Nonpathogenic. These isolates tested on cultivars Bonny Best,Datura, Cicer and Nightshade, proved to be Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici. Patogenic test on differential hosts done and confirmed the existence of race1 in Khorasan province. For TLC analysis these isolates loaded on silicagel paper with 2 standards including: ?- tomatine and tomatidine that there all had tomatinase activity and 2 spots of these isolates seen on plate.