بررسي بيان موقت ژن VP2 ويروس بسيار حاد بيماري بورس عفوني در برگ توتون، يونجه و كاهو به روش آگرواينفيلتراسيون

Transient expression of VP2 gene of very virulent IBDV in tobacco, Alfalfa and lettuce leaves by agroinfiltration

پروتيين VP2 ايمونوژن اصلي محافظت‌كننده جوجه‌ها در برابر ويروس بيماري بورس عفوني است و با توجه به اهميت و مقبوليت فناوري جديد توليد پروتيين‌هاي نوتركيب شامل واكسن‌ها، پادتن‌ها و داروها درگياهان، توليد پروتيين نوتركيب VP2 بسيار مورد توجه قرار دارد. در اين تحقيق از بيان موقت ژن VP2 به روش آگرواينفيلتراسيون يا انتقال ژن تحت خلا توسط آگروباكتريوم، براي توليد اين پروتيين نوتركيب درگياهان توتون، يونجه وكاهو استفاده شده است. بدين منظورآگروباكتريوم حاوي پلاسميد pBI121 حاوي ژن VP2 به طول 1356 جفت باز تحت پروموتر CaMV35S به بافت برگ‌هاي تازه اين گياهان منتقل گرديد. بيان موقت پروتيين در برگ‌هاي تراريخت، با استفاده از پليت الايزا و لكه‌گذاري پروتيين اندازه‌گيري شد. با استفاده از روش آگرواينفيلتراسيون و انتقال سازه بياني VP2، بيشترين بيان اين پروتيين به ترتيب در برگ‌هاي ترآريخت يونجه و توتون و كمترين بيان در برگ‌هاي ترآريخت كاهو بدست آمد.

VP2 protein is the major host protective immunogen of infectious bursal disease virus (IBDV) of chickens. Plants are now gaining widespread acceptance as a general platform for the large scale production of recombinant proteins including vaccine, antibodies and pharmaceuticals. In present study VP2 gene of an Iranian isolate of IBDV was cloned under strong plant expression promoter CaMV35S and introduced to Agrobacterium tumefaciens. Using agro-infiltration method, VP2 protein was expressed in Tobacco (Nicotiana tobacum), Alfalfa (Medicago sativa) and Lettuce (Lactuca sativa) leaves. The expression of VP2 was detected in leaves extracts by western blot and ELISA methods. The highest expression was detected in alfalfa and tobacco leaves and lowest expression was found in lettuce.