جداسازي و شناسايي باكتري هاي كوكسي شكل بيماريزا در ماهيان قزل آلاي رنگين كماني در مزارع پرورشي شمال غرب استان فارس با استفاده از روش هاي كشت و PCR

Isolation and Identification of Pathogenic Cocci-form Bacteria of Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss) in Fish Farms in North Western Parts of Fars Province By Using Culture and PCR Methods

يكي از بيماري هاي مهم در آبزي پروري بيماري استرپتوكوكوزيس/ آنتروكوكوزيس است كه يك بيماري عفوني سپتي سميك ناشي از كوكسي هاي گرم مثبت در ماهيان آب هاي شيرين و شور بوده و در چند دهه اخير خسارات اقتصادي جبران ناپذيري را به بار آورده است. از جمله باكتري هاي مهم، لاكتيك اسيد باكتري ها هستند كه مزارع پرورشي را مورد هجوم قرار داده و تلفات سنگيني را به جاي مي گذارند. هدف از اين پژوهش شناسايي كوكسي هاي گرم مثبت بيماري زا در مزارع پرورشي قزل آلاي رنگين كمانيي در قسمت شمال غربي استان فارس با استفاده از روش هاي كشت و PCR است. از مزارع مشكوك به بيماري تعداد 90 نمونه ماهي قزل آلاي رنگين كماني برداشته شد. پس از بررسي و ثبت مشخصات باليني ماهيان بيمار و تلف شده، از اندام داخلي كه شامل بافت كليه ماهيان بيمار مي باشد نمونه برداري و با انجام كشت و تست هاي بيوشيميايي لازم شناسايي باكتري ها صورت گرفت. در مرحله بعدي جهت تعيين نوع آنتي بيوتيك موثر بر باكتري هاي شناخته شده، تست آنتي بيوگرام صورت گرفت. در نهايت با استفاده از روش مولكوليPCR بر پايه ژن 16srRNA شناسايي باكتري ها انجام شد. از بين 43 نمونه كه كوكسي گرم مثبت شناخته شدند، 3 گونه باكتري شامل 6/4 درصد استرپتوكوكوس اينيايي، 3/23 درصد لاكتوكوكوس گارويه آ و 1/72 درصد استرپتوكوكوس ميلري تشخيص داده شدند. نتايج تست PCRنشان داد كه باكتري هاي شناخته شده جزو باكتري هاي لاكتيك اسيد بوده كه باعث ايجاد بيماري در ماهيان مي شوند. با توجه به اينكه بيماري مذكور از لحاظ اقتصادي و مشترك بودن بين انسان و آبزيان بسيار مهم مي باشد لذا شناسايي و درمان اين عوامل عفوني حايز اهميت است.از آنجا كه علايم باليني تمامي باكتري هاي مسبب بيماري بسيار شبيه بوده و با استفاده از روش هاي بيوشيميايي امكان تشخيص نادرست وجود دارد بنابراين دقيق ترين روش ممكن استفاده از روش مولكولي PCR است.

Streptococcosis/Entrococcosis is an important disease in aquaculture which are duo to gram positive bacteria such as cocci in fresh and salty water fish and cause infectious and septicemia. In recent decades the mentioned diseases caused economic damages. One of the most important cocci are lactic acid bacteria. They invaded to fish farms and caused to death of them. The aim of this research was identification of gram positive and pathogenic cocci form bacteria in rainbow trout farms in North West area of Fars Province by cultivation and PCR methods. At first 90 samples of rainbow trout were collected from farms where might be contaminated. Then dead and sick fish were identified and their clinical profiles were recorded. Sampling from their kidney was done for cultivating bacteria and doing biochemical test to identify them. In the next step for determination of antibiotic that was effective on identified bacteria antibiogram test was done. At the end identification of bacteria was done by PCR method in the base of 16srRNA gene. In this research 43 gram positive cocci were identified they included: 4.6% Streptococcus iniae, 23.3 % Lactococcus graviae, and 72.1 % Streptococcus milleri. The result of PCR test showed that identified bacteria belonged to lactic acid bacteria that caused diseases in the fish. As regards the diseases are common between human and aquaculture and they cause economical damages so identification and treatment of these infectious agents are important. Clinical symptoms of bacteria which cause the diseases are similar so the best method for identification of them is PCR.