تعيين هويت مولكولي عوامل ايجادكننده ليشمانيوز جلدي در شهرستان بيرجند

Molecular identification of cutaneous leishmaniasis agents in Birjand, Iran

زمينه و هدف: ليشمانيوز جلدي يا سالك، در مناطق مختلفي از ايران آندميك است. اين بيماري، در ساليان گذشته به‌صورت تك‌گير در بيرجند ديده شده است، اما به‌نظر مي‌رسد از حدود پنج سال قبل، كانوني پايدار از آن در منطقه پديد آمده باشد. مطالعه حاضر، براي تعيين گونه انگل‌هاي ليشمانيا در ضايعات جلدي بيماران ساكن شهرستان بيرجند انجام شده است. روش تحقيق: در اين مطالعه مقطعي، نمونه‌هاي ضايعات جلدي بيماران مشكوك به سالك طي 5 سال گذشته، برابر با 80 نمونه‌ كه در مركز بهداشت شهرستان بيرجند موجود بود، مورد مطالعه قرار گرفت. بخش متغير از DNA كينتوپلاستي انگل ليشمانيا (KDNA) و نيز بخش ITS1 از DNA ريبوزومي اين انگل‌ها، توسط روش PCR تكثير گرديد و از روش PCR-RFLP، بر روي محصولات بخش ITS1 براي تعيين هويت انگل‌ها استفاده شد. يافته‌ها: تمامي نمونه‌هاي با تشخيص مثبت ميكروسكوپي، توسط روش PCR-RFLP بر روي قطعه ITS1 از DNA ريبوزوزمي تعيين گونه گرديدند، اما روش KDNA PCR توانست، تنها 46 نمونه را تعيين گونه نمايد. در مجموع، 8 بيمار (%10)، مبتلا به ليشمانياماژور و 72 نفر (%90)، آلوده به ليشمانياتروپيكا تشخيص داده شدند. نتيجه‌گيري: روش PCR-RFLP قطعه ITS1، داراي حساسيّت كامل بوده و براي تشخيص ليشمانيوز و تعيين گونه سريع انگل‌هاي عامل بيماري توصيه مي‌‌شود. بر اساس نتايج اين تحقيق هر دو فرم بيماري سالك يعني ACL (با مخزن انساني) ناشي از ليشمانيا تروپيكا و ZCL (داراي مخازن جانوري) منتج از ليشمانيا ماژور در بيرجند موجود است.

Background and Aim: Cutaneous leishmaniasis (CL) is an endemic disease in different areas of Iran. During past years, the disease was sporadic in Birjand. But, it seems that during recent five years a stable focal leishmaniasis has been developed in the area. The present study was designed to determine the species of Leishmania parasites in cutaneous lesions of patients residing in the city of Birjand. Materials and Methods: In this cross-sectional study, 80 samples of microscopically-positive slides of cutaneous lesions, belonging to suspected CL patients during the past five years, were examined. The variable kinetoplastic regions of the DNA of leishmania and ribosomal Internal Transcribed Subunit 1 (ITS1) of the parasite were multiplied by means of PCR procedure .Then, All PCR products of ITS1 were digested with HaeIII for species identification. Results: PCR-RFLP profile of ITS1 rDNA was able to identify species of leishmania in all 80 microscopically-positive (100%) slides and 13 out of 30 (43.3%) microscopically-negative ones. But only 46 samples (57.5%) were identified by means of KDNA PCR. Among the the all subjects, 8 patients (10%) had leishmania major and 72 (90%)had been infected with leishmania tropica. Conclusion: PCR-RFLP of ITS1 rDNA of leishmania is recommended to diagnose infection with CL agents, because of its high sensitivity.