تعيين چندشكلي ژن POU1F1 در گوسفندان نژاد ماكويي به روش PCR-SSCP و ارتباط آن با برخي از صفات مربوط به رشد

POU1F1 gene polymorphism of Makuyi sheep breed and its association with growth- related traits using by PCR-SSCP

ژن POU1F1 (PIT-1 يا GHF-1) به عنوان يكي از اعضاي خانواده فاكتورهاي رونوشت برداري ژن POU، عمدتاً در غده هيپوفيز بيان شده و يك تنظيمكننده مثبت براي هورمون رشد، هورمون پرولاكتين، هورمون محرك تيروييد، خود POU1F1 و همچنين ژنهاي مربوط به گيرنده هاي هورمون آزادكننده هورمون رشد ميباشد. به منظور بررسي چند شكلي هاي موجود در اين ژن در گوسفندان نژاد ماكويي، پس از استخراج DNAبه روش نمكي از 95 نمونه خون گوسفندان نر و ماده متعلق به اين نژاد از مركز اصلاح نژاد ماكو، از واكنش زنجيرهاي پليمراز براي تكثير قطعه 295 bp ازDNA (بخشي از اينترون 2، اگزون 3 و بخشي از اينترون 3) توسط يك جفت آغازگر اختصاصي طراحي شده، استفاده شد. بررسي چندشكلي فرم فضايي رشتههاي منفرد (SSCP) محصولات PCR توسط ژل پليآكريلاميد 6% و رنگآميزي نيترات نقره انجام شد. درنهايت 4 الگوي باندي متفاوت AA، AB، CC و CDبترتيب با فراوانيهاي45/0،073/0،44/0و037/0مشاهده شدند. فراواني آللهاي A، B، C و Dدر جمعيت مورد بررسي بترتيب 4895/0، 0368/0، 4579/0و0158/0 محاسبه شد. تنوع ژنتيكي براي اين ژن 20/55% بدست آمد. نتايج نشان دادند كه تعادل هاردي- واينبرگ در جمعيت مورد مطالعه گوسفندان ماكويي وجود ندارد. ارتباط معنيداري بين ژنوتيپها و وزن بدن در نه ماهگي و يكسالگي (05/0P < ) مشاهده شد، بطوري كه حيوانات با ژنوتيپ CC داراي ميانگين وزن نه ماهگي (8/33 كيلوگرم) و وزن يكسالگي (75/44كيلوگرم) بيشتري در مقايسه با دامهاي با ژنوتيپ AA(بترتيب 88/27 و 74/39 كيلوگرم) در همين سنين داشتند.

POU1F1 (also named PIT-1 or GHF-1) as a member of the POU family of transcription factors, is mainly expressed in the pituitary and has positive regulation on growth hormone, prolactin, thyroid-stimulating hormone B, POU1F1 itself and growth hormone releasing hormone receptor genes. In order to investigate POU1F1 gene polymorphism of Makuyi sheep breed, after extraction of DNA with salting out method from blood samples of 95 males and females belonging to this breed from breeding center of Maku, the polymerase chain reaction was used to amplify 295 bp DNA fragment (a part of intron 2, exon 3 and a part of intron 3) with a pair of designed specific primers. The single stranded conformation polymorphism (SSCP) patterns of PCR products were studied using 6% polyacrylamide gel and silver staining method. Finally 4 band patterns AA, AB, CC and CD were obtained with frequencies of 0.45, 0.073, 0.44 and 0.037, respectively. The frequency of A, B, C and D alleles was calculated as 0.4895, 0.0368, 0.4579 and 0.0158, respectively. Gene diversity was 55.2%. The results indicated that Makuyi sheep population was not in Hardy-Weinberg equilibrium (P < 0.05). Significant (P < 0.05) statistical relationships between polymorphism of POU1F1 gene and body weights at 9 (W9) and 12 (W12) months were found. The CC genotype was associated with highest W9 and W12 (33.8 and 44.75 Kg, respectively) than AA genotype.