مقايسه روش هاي آزمايشگاهي IVF و Piezo-ICSI از نظر تكوين جنين در موش NMRI غير همخون

Comparison of two IVF and Piezo-ICSI experimental methods from standpoint of embryo development in outbred NMRI mouse

براي انجام لقاح آزمايشگاهي IVF ، از 20 سرموش ماده نژاد غيرهمخون NMRI پس از ازدياد تخمك گذاري، 435 اووسيت در محيط M2 حاوي 4 درصد BSA جمع آوري شد كه 85 درصد (370=n) از آن ها در فاز MII بودند. تعداد 332 اووسيت در قطرك هاي محيط T6 حاوي 4 درصد BSA در مجاورت اسپرم هاي اپيديديمي در انكوباتور قرارگرفتند. ميزان لقاح اووسيت ها 8/79 درصد (265=n) مشاهده و ثبت گرديد كه 5/27 درصد (73=n) از اين سلول هاي لقاح يافته به مرحله جنيني مورولا، 8/20 درصد (55=n) به مرحله جنيني بلاستوسيت رسيدند براي انجام پيزو -ICSI -Piezo) ICSI)، نيز از 20 سر موش ماده نژاد NMRI سوپر اووله شده، استفاده شد. تعداد 355 اووسيت در محيط M2 حاوي 4 درصد BSA جمع آوري شدند. ارزيابي ها نشان داد 83 درصد (295=n) از اووسيت ها در فاز MII بودند. با استفاده از دستگاه ميكرو انجكشن پيزو، اسپرم هاي اپيديديمي به داخل سيتوپلاسم 213 اووسيت فاز MII تزريق و سپس اووسيت ها انكوبه شدند. مشاهدات نشان داد (133=n) 4/62 درصد از اووسيت ها پس از ريز تزريقي لقاح يافتند و 14 درصد (30=n) منحط شدند. 39 درصد (52=n) از سلول هاي لقاح يافته به مرحله مورولا، و 8/12 درصد (17=n) به مرحله بلاستوسيت در محيط آزمايشگاه رسيدند. در اين مطالعه، ميزان باروري سلول هاي جنسي، رشد و بقاي جنين هاي توليد شده در محيط آزمايشگاه مورد ارزيابي قرار گرفت. نتايج نشان مي دهند كه با استفاده از تكنيك لقاح آزمايشگاهي (IVF) در موش آزمايشگاهي غيرهمخون- متعارف در شرايط معمول، ميزان لقاح آزمايشگاهي افزايش يافته و جنين هاي آزمايشگاهي با كيفيت وكميت بهتري توليد مي شوند ضمن آنكه روشي آسان تر و مقرون به صرفه تر از روش ميكرواينجكشن پيزو -ICSI است. بطور كلي پيشنهاد مي شود در انجام تحقيقات از موش آزمايشگاهي غير همخون NMRI كه در شرايط متعارف به آساني قابل تكثير و نگهداري مي باشند، براي دريافت تخمك و توليد جنين در فناوري باروري ياري شده (Assisted Reproduction Technology) استفاده گردد.

In order to do in vitro fertilization (IVF), 435 oocytes were collected from 20 super ovulated NMRI female mice, in M2 media with 4% BSA. 85% (n=370) of collected oocytes were in MII phase. Epididymal sperms were added to 332 oocytes in T6 media drops with 4% BSA and incubated. Fertilization rate was 79.8% (n=265) out of which 27.5% (n=73) grew to morula and 20.8% (n=55) achieved blastocyst stages.For Piezo- intracytoplasmic sperm injection (Piezo-ICSI), 20 super ovulated female mice were sacrificed and 355 oocytes were collected in M2 media with 4% BSA. 83% (n=295) of collected oocytes were in MII phase. Epididymal sperms were piezo-injected to cytoplasm of 213 MII oocytes and incubated. 62.4% (n=133) of injected oocytes were fertilized and 14% (n=30) degenerated. 39% (n=52) of fertilized cells grew to morula and 12.8% (n=17) to blastocyst stages embryos at laboratory conditions. In this study the fertilization rate of gametes, growth and survival rate of laboratory embryos were evaluated in vitro. Results show higher fertilization rate and the laboratory embryos with desirable quality and quantity were obtained by the use of IVF technique from conventional-outbreed laboratory mouse, that is economical and easy as compare to Piezo-ICSI. However, outbred laboratory NMRI mouse that can be easily bred and kept in conventional conditions is recommended for use in oocyte recovery and embryo production in assisted reproductive technology.