طراحي يك روش سريع براي تشخيص كيست هيداتيك در گوسفند

Designing a rapid test to diagnose the ovine hydatid cyst

زمينه مطالعه: استفاده از يك آزمون سريع و مقرون بصرفه براي تشخيص هيداتيدوز بعنوان بيماري مشترك بين انسان و حيوان مي‌تواند بسيار مفيد باشد. هدف: هدف از بررسي حاضر طراحي و بكارگيري نوعي روش سريع در تشخيص هداتيدوز بوده است. روش كار: ‌دو نوع آنتي‌ژن مايع خام و آنتـي‌ژن همـوژنيـزه پـروتـواسكـولكس تهيه و الگوي الكتروفورتيك آنها توسط الكتروفورز با سديم دودسيل سولفات تعيين شد. براي تهيه سرم هيپرايميون از خرگوش بعنوان حيوان آزمايشگاهي استفاده گرديد. سرم‌هاي ايمن بعد از تهيه توسط الايزا‌نقطه‌اي آزمايش شدند. جهت انجام روش Dipstick از كاغذ نيتروسلولز بعنوان بستر استقرار آنتي‌ژن‌ها استفاده شد و لكه‌گذاري آنتي‌ژن در بخش بالايي نوارهاي كاغذي انجام گرفت. از فسفات بافرسالين و سرم خرگوش بترتيب بعنوان كنترل منفي و نرمال استفاده شد. هر نوار بطور مجزا در سرم تحت آزمايش (به نسبت 100/1) بمدت هفت دقيقه قرار گرفت و بعد از شست‌وشو براي هفت دقيقه به آنتي‌بادي گونژوكه انتقال يافت. در پايان نوار براي 2 دقيقه به سوبستراي دي‌آمينوبنزيدين منتقل شد و نتيجه با رنگي شدن محل استقرار آنتي‌ژن مشخص گرديد. نتايج: ‌بررسي نتايج الگوي الكتروفورتيك دو آنتي‌ژن تهيه شده از كيست هيداتيك نشان داد در آنتي‌ژن مايع خام كيست 15 باند پروتييني با وزن مولكولي kDa29 تا 130 و در الكتروفورز آنتي‌ژن پروتواسكولكس 9 باند با وزن مولكولي kDa25 تا 90 وجود دارد. در طراحي روش سريع براي شناسايي سرم‌هاي ايمن بهترين نتيجه با رقت سرمي 100/1 و از نظر آنتي‌ژن غلظت 10/1 براي آنتي‌ژن پروتواسكولكس و غلظت 20/1 براي آنتي‌ژن مايع ديده شد. نتيجه‌گيري‌نهايي: مي‌توان از آزمون سريع Dipstick بعنوان يك روش ايمونولوژيك مناسب در تشخيص بيماري هيداتيد استفاده كرد، با اين وجود بمنظور افزايش ويژگي آزمون تحقيقات بيشتري در مورد بهره گيري از آنتي ژن‌هاي اختصاصثي بايد انجام پذيرد.

Background: Using a rapid and cost benefote test for diagnosing of hydatidosis, a zoonotic, can be beneficial as a diagnostic. Objectives: The aim of the present study was to design and assess the performance of a dipstick method for diagnosting of cystic echinococcosis. Methods: Hydatid cyst fluid antigens and homogenized antigens of protoscolex were prepared and its electrophoretic pattern was determined by SDS-PAGE. Afterthen, for providing the hyperimmune serum, rabbits were injected by hydatid cyst fluid and protoscolex antigens along with complete freund adjuant and then incomplete freund adjuant. The immune sera were evaluated by dot ELISA. Dipstick was prepared based on nitrocellulose paper as solid phase and coated with antigens which were dotted in the upper surface of the nitrocellulose strip. PBS was used as negative control and rabbit sera non-infected were used as positive control. As a negative control the lower part of the strip was coated by PBS. Each strip was floated in the serum (1:100 dilution) for 7min, washed for 7min and floated in the second antibody 7min. Afterthen, they were washed and incubated in chromogen/substrate diaminobenzidin for 2min to show the coloured band at the site of coated antigen. Results: Our findings revealed 15 protein fractions in fluid antigens and 9 protein band in protoscolex antigens at the range of 29-130 kDa and 25-90 kDa, respectively. Meanwhile, the protoscolex antigens at in 1:10 dilution and fluid antigens at in 1:20 dilution showed the best results to diagnose hyper immune serum of 1:10 dilution. Conclusions: This rapid Dipstick assay test can be considered as a suitable immunodiagnostic test for hydatid cyst disease; however further investigations should be done to improve its specificity through preparing highly purified antigens.