بررسي و مقايسه ميزان مهار ژن CERB با استفاده از دو siRNA اختصاصي آن در رده سلولي HeLa

Assessing the Levels of CREB after siRNA Mediated Knock Down in HeLa Cells

پروتيين CREB يك فاكتور مهم پايين دست بسياري از مسيرهاي سيگنالي به شمار مي رود. با داشتن siRNA كارآمد براي ژن CREB مي توان مسير هاي سيگنالي بسياري از داروها را در سلول هاي مختلف بررسي نمود. در اين تحقيق ميزان مهار بيان ژن CREB با بكارگيري دو siRNA مختلف براي اين ژن در سلول هاي HeLa مورد بررسي قرار گرفت. جهت بررسي ميزان مهاري دو siRNA CREB، سلول هاي HeLa با روش Lipofection ترانسفكت شدند. استخراج RNA وسنتز cDNA صورت گرفته، بررسي اثر مهاري بيان ژن CREB با استفاده از Relative Quantitative Real time PCR انجام گرفت طبق نتايج به دست آمده يكي از siRNA ها اثر مهاري بالايي برروي بيان CREB در سلول هاي HeLa نشان داد، و بيان ژن CREB، 5/64درصد در اين سلول ها كاهش يافت. بر اساس نتايج اين تحقيق، siRNA CREB با كارايي بالا توانست اثر مهاري را در سلول هاي HeLa نشان دهد. با استفاده از siRNA كارآمدي كه در اين تحقيق جهت مهار ژن CREB طراحي و در سلول هاي HeLa استفاده گرديد، مي توان از CREB siRNA در سلول هاي ديگر جهت بررسي مسير سيگنالي نيز استفاده نمود.

CREB is an important downstream protein for many signaling pathways. By having efficient siRNAs against CREB, it may be possible to assess the role of molecules involved in signaling pathways in different cell types. In this research the efficiency of CREB knockdown by 2 different siRNAs in HeLa cells has been studied. HeLa cells were transfected by siRNAs using Lipofectamine 2000. RNA extraction and cDNA synthesis have been done. The efficiency of CREB knockdown has been assessed by quantitative relative real time PCR. According to our results only one of the siRNAs has a high level of inhibitory effect on CREB gene expression in HeLa cells. The expression of CREB by this siRNA was knocked-down by 64.4% in HeLa cells. By using efficient siRNA specifically for knocking down of CREB gene, we can apply this efficient siRNA in different cell types due to study of signaling pathway which CREB may be involved.